BPS Bioscience 腺苷A2A受体功能HEK293细胞系的免疫检查点功能与潜在治疗应用

腺苷A2A受体（A2aR或ADORA2A）在HEK293细胞中稳定表达（NM_000675.5）。A2aR是七跨膜G蛋白偶联受体（GPCR）家族的成员。A2aR的活动通过Gαs蛋白介导，该蛋白激活腺苷酸环化酶，导致细胞内cAMP的合成。cAMP的水平与腺苷的水平相关。这个细胞系可以用来测量A2aR激动剂或拮抗剂的EC50和IC50值。

腺苷信号在炎症和免疫反应中扮演着重要角色。肿瘤微环境中的许多细胞表达异位的CD39和CD73，导致细胞外腺苷的积累。腺苷与T细胞、巨噬细胞、NK细胞、中性粒细胞和树突状细胞表面的高亲和力腺苷A2A受体（A2aR）结合，导致免疫反应的下调。因此，A2aR是一种新型的免疫检查点蛋白，A2aR的阻断正在作为潜在的免疫疗法被积极研究。几种A2aR拮抗剂已经进入帕金森病治疗的临床试验，并且前临床研究已经证实阻断A2aR激活能够显著增强抗肿瘤免疫。用A2aR拮抗剂（如ZM241385或咖啡因）处理的小鼠显示出明显的肿瘤生长延迟，而A2aR敲除小鼠显示出增加的肿瘤排斥。最有希望的是，A2aR阻断可以与其他免疫检查点途径的抑制协同使用。研究表明，A2aR阻断和PD-1抑制的联合使用比单独任一治疗更有效，A2aR阻断增加了CTLA-4和TIM-3抑制在控制CD73+黑色素瘤生长中的活性。

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品腺苷A2A受体功能HEK293细胞系。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

应用

? 筛选或滴定A2aR的激动剂或拮抗剂。

? 研究PD-1和CTLA-4联合疗法。

细胞培养协议

细胞解冻

1. 在37°C水浴中摇晃冷冻细胞的小瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将整个小瓶内容物转移到含有10毫升预温的解冻培养基1（不含潮霉素）的试管中。在37°C水浴中放置过久会导致细胞活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在5毫升预温的解冻培养基1（不含潮霉素）中重悬细胞。

3. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C的5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换为新鲜的解冻培养基1（不含潮霉素），并在37°C的5% CO2培养箱中继续培养，直到细胞准备好传代。

5. 细胞应在完全融合前传代。在第一次传代及后续传代中，使用生长培养基1G（含潮霉素）。

细胞传代

1. 抽吸培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1G并转移到试管中。以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在生长培养基1G（含潮霉素）中重悬细胞。按照期望的次培养比例[每周1:6至1:8或每周两次]接种到新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽吸培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1G并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在4°C的冷冻培养基（BPS Bioscience #79796，或10% DMSO + 90% FBS）中重悬细胞至约2 x 10^6细胞/毫升。

4. 将1毫升的细胞等分到冷冻小瓶中。将小瓶放置在保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜保存。

5. 次日将小瓶转移到液氮中保存。

数据展示：

图1：在HEK293细胞表面表达人类A2aR。

细胞与PE标记的抗人A2aR抗体（R&D Systems #FAB94971P100）共同孵育，并通过流式细胞仪进行分析。亲本HEK293细胞用作阴性对照（红色）。

检测到一个A2aR阳性的克隆群体（克隆B11）（蓝色）。

文献参考：

1. Leone RD, et al. (2015) Comp. Struct. Biotechnol. J. 13: 265-272

2. Ma S-R, et al. (2017) Molec. Cancer 16: 99

3. Ohta A, et al. (2016) Front. Immunol. 7: 109.

4. Yang et al, et al. (2017) Purinergic Signal. 13(2): 191–201

5. Mediavilla-Varela, et al. (2017) Neoplasia. 19(7) : 530–536 

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