BPS Bioscience ZsGreen/荧光素酶安全港 HEK293 细胞系解决方案

描述

重组稳定HEK293细胞系，持续表达ZsGreen（来自Zoanthus sp. 珊瑚的亮绿色荧光蛋白）和萤火虫荧光素酶，这些基因已通过CRISPR/Cas9稳定整合到染色体19上的AAVS1安全港位点。ZsGreen和荧光素酶报告基因的表达由EF1A启动子驱动。通过限制稀释法筛选获得单克隆群体。ZsGreen/荧光素酶没有随机整合到HEK293基因组中，保证了这个细胞系的行为与亲本HEK293细胞相似。

背景

人类染色体19上的AAVS1（也称为PPP1R12C位点）是一个经过充分验证的“安全港”位点，用于承载DNA转基因。AAVS1具有开放的染色质结构，并且具有转录能力。最重要的是，使用CRISPR/Cas9插入DNA转基因破坏AAVS1位点对细胞没有已知的不良影响。特别针对AAVS1位点是一个主要优势，与使用其他方法（如慢病毒感染或细胞转染）获得的随机整合相比，后者可能会引起插入性突变或破坏重要基因或细胞过程。生成同时含有荧光标记和荧光素酶的细胞系，允许在多种检测类型中轻松读取结果，从体外到体内应用。

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品ZsGreen/荧光素酶安全港 HEK293 细胞系。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

应用

? 用作基于细胞的检测中的对照。

? 用作进一步遗传修饰的兴趣基础细胞系模型。

细胞培养协议

注意：HEK293细胞源自人类材料，因此建议采取适当的安全预防措施。

细胞解冻

1. 在37°C水浴中摇晃冷冻细胞瓶大约60秒。一旦细胞解冻（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将瓶中全部内容物转移到含有10毫升预温的解冻培养基6的试管中。在37°C水浴中放置过久会导致细胞活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在5毫升预温的解冻培养基6中重悬细胞。

3. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C的5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换为新鲜的解冻培养基6，并在37°C的5% CO2培养箱中继续培养细胞，直到准备好传代。

5. 细胞应在完全融合前传代。

细胞传代

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入解冻培养基6并转移到试管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在解冻培养基6中重悬细胞。

4. 按照推荐的次培养比例1:6至1:8，每周一次或两次接种到新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入解冻培养基6并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在4°C的细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬细胞至约2 x 10^6细胞/毫升。

4. 将1毫升的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。

5. 将小瓶放置在保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜保存。

6. 次日将小瓶转移到液氮中进行长期储存。

数据展示：

图：PCR扩增整合到HEK293细胞基因组中的转基因。

在整合的5'端，跨越染色体19 AAVS1位点和启动子整合开始的区域通过PCR扩增，预计大小为1.1 kb。在整合的3'端，跨越SV40 Poly A信号区域整合和染色体19 AAVS1位点的区域通过PCR扩增，预计大小为1.2 kb。

文献参考：

RFP/GFP Safe-Harbor HEK293 Cell Line 78581 2 vials

Cas9/GFP Safe-Harbor Hek293 Cell Line 78582 2 vials

AAV-DJ ZsGreen 78442 50 μl x 2

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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