兔抗RIF1亲和纯化抗体，三应用全覆盖，一抗多用简化流程

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗体为兔源多克隆抗体（货号：A300-569A），特异性靶向RIF1（Rap1相互作用因子1）蛋白的C末端区域（第2422位至C末端之间）。RIF1是一种多功能蛋白，参与端粒功能调节、S期检查点调控以及DNA双链断裂（DSB）损伤应答，其损伤诱导的焦点形成完全依赖于ATM激酶。该抗体经抗原亲和纯化，未偶联标记，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB），反应种属为人。以下将从基本参数、免疫原信息、应用条件、储存稳定性及生物学背景等方面进行详细说明。

一、关键规格参数

项目 | 详细内容

靶标 | RIF1 (Rap1 Interacting Factor 1)

反应种属 | 人类

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原 | 对应人RIF1蛋白第2422位至C末端（第2472位）之间的表位（参考序列NP_060621.3，GeneID 55183）

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯化方式 | 抗原亲和纯化（使用固定化的RIF1特异性表位）

抗原物种 | 人

浓度 | 1000 ?g/mL

缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮钠

储存条件 | 2–8 °C

保质期 | 收货后1年

生产流程 | 亲和纯化后，通过Beer定律测定IgG浓度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值为1.4）

> 注：0.09%叠氮钠作为防腐剂，在IP后WB使用HRP标记二抗时需注意其抑制作用。建议在IP洗脱或二抗孵育前充分去除叠氮钠。

二、免疫原与特异性

本抗体的表位定位于人RIF1蛋白的C末端区域（第2425至2472位氨基酸）。通过固相载体上固定的特异性表位进行亲和纯化，确保抗体识别天然及变性的RIF1。该C末端区域在哺乳动物中相对保守，但经验证本抗体主要识别人源RIF1，对小鼠反应性未标注（规格中仅列Human）。亲和纯化步骤有效去除了针对其它表位的交叉反应抗体，降低背景。实际实验中建议以阳性对照（如HEK293或HeLa细胞裂解液）确认信号。RIF1分子量较大（约270-280 kDa），WB中呈现为高分子量条带。

三、推荐应用与实验条件

以下稀释度均为起始推荐范围，用户需根据具体实验体系进行优化。

1. 免疫印迹（Western Blot, WB）

稀释度：1:1000 – 1:5000  

凝胶建议：推荐使用3-8% Tris-醋酸（Tris-acetate）凝胶，以有效分离高分子量蛋白（~280 kDa）。常规Tris-甘氨酸凝胶对大于250 kDa的蛋白分辨率较差。  

封闭液及抗体稀释液：5%脱脂奶粉-TBST（Tris缓冲盐水+0.1% Tween-20）  

孵育条件：一抗4°C孵育过夜（推荐）  

二抗推荐：  

常规细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体，如货号A120-101P。  

免疫沉淀后WB：为避免变性IP产物中重链（~55 kDa）信号干扰，推荐使用抗兔IgG轻链特异性HRP标记二抗，并在封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景。  

阳性对照：HEK293、HeLa细胞裂解液。建议同时使用过表达RIF1的细胞系作为强阳性对照。

2. 免疫组织化学（IHC）

稀释度：1:1000 – 1:5000  

抗原修复：对FFPE（福尔马林固定、石蜡包埋）组织切片，必须使用pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复。  

推荐对照：使用兔IgG同型对照作为阴性对照，以阳性组织（如睾丸、多种肿瘤组织）确认染色特异性。  

检测系统：适用于显色法（DAB）或荧光法IHC。RIF1在细胞核中定位。

3. 免疫沉淀（IP）

用量：6 ?g抗体 / mg总蛋白裂解液  

操作建议：  

裂解液推荐使用非变性裂解缓冲液（如NP-40或RIPA，避免高浓度SDS），以维持RIF1与相互作用蛋白（如Rap1、ATM等）的结合。  

孵育条件：4°C旋转孵育2小时或过夜。  

使用Protein A/G琼脂糖或磁珠捕获免疫复合物。  

洗脱后通过WB检测，务必使用抗兔IgG轻链特异性二抗以避免重链干扰。  

阳性对照：过表达RIF1的细胞裂解液或内源性表达较高的细胞（如HeLa、HEK293）。

> 注：本产品未验证用于ICC-IF，用户需自行探索。

四、产品特性与质量控制

纯化工艺：采用表位特异性亲和纯化，较常规蛋白A/G纯化具有更高的特异性，显著降低非特异性背景。C末端表位（2425-2472）的选择避免了与其它DNA损伤应答蛋白（如53BP1、Rap1）的同源区，提升靶向性。  

浓度与效价：浓度高达1000 ?g/mL，IHC最高稀释达1:5000，WB达1:5000，经济性良好。  

功能验证：每批抗体均通过WB检测多种人细胞裂解液中的内源性RIF1（~280 kDa），确认单一条带位置正确。同时通过IP验证其捕获内源性RIF1及下游复合物的能力。  

大蛋白检测优化：规格中特别建议使用3-8% Tris-acetate凝胶，避免了常规凝胶系统对大分子量蛋白转移效率低、条带弥散的问题。  

批次间一致性：生产记录完整，遵循内部QC标准，符合ISO 9001质量管理体系（母公司Fortis Life Sciences）。  

优势总结：  

三应用验证（IHC、IP、WB） → 一抗多用  

明确大分子量WB条件（Tris-acetate凝胶） → 减少优化时间  

IP用量明确（6 ?g/mg裂解液） → 节省摸索成本  

轻链专用二抗配套方案 → IP-WB无重链干扰  

长效稳定储存（2-8°C） → 即用型方便  

五、储存与稳定性

储存温度：2–8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性、效价下降。  

运输条件：湿冰运输，收货后请立即按上述温度保存。  

分装建议：若需长期使用，建议分装成小份后存放于2–8°C，避免污染。不可稀释后长期储存。  

有效期：自收货之日起1年。过期产品可能信号减弱，建议重新订购。