兔抗DDB1抗体亲和纯化，IP-WB无缝衔接，彻底消除重链干扰

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗体为兔源多克隆抗体（货号：A300-462A），特异性靶向DDB1（DNA损伤结合蛋白1）的C末端区域（第1090位至C末端之间）。DDB1是UV损伤DNA结合蛋白复合物（DDB）的大亚基（p127），也是Cullin 4（Cul4）泛素连接酶复合物的核心组分，通过组蛋白泛素化及染色质结合因子调控参与核苷酸切除修复（NER）和染色质重塑。该抗体经抗原亲和纯化，未偶联标记，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB），且与人、小鼠样本有交叉反应性。以下将从基本参数、免疫原信息、应用条件、储存稳定性及生物学背景等方面进行详细说明。

一、关键规格参数

项目 | 详细内容

靶标 | DDB1 (DNA Damage Binding Protein 1)

反应种属 | 小鼠、人类

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原 | 对应人DDB1蛋白第1090位至C末端（第1140位）之间的表位（参考序列TrEMBL Q13289，GeneID 1642）

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯化方式 | 抗原亲和纯化（使用固定化的DDB1特异性表位）

抗原物种 | 人

浓度 | 200 ?g/mL

缓冲液 | Tris-缓冲盐水，含0.1% BSA和0.09%叠氮钠

储存条件 | 2–8 °C

保质期 | 收货后1年

生产流程 | 亲和纯化后，通过Beer定律测定IgG浓度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值为1.4）

> 注：本品浓度较低（200 ?g/mL），且缓冲液中含0.1% BSA作为稳定蛋白，使用时应根据实验需求选择适当的稀释度。含BSA的抗体通常背景更低，但用于IP时BSA可能轻微竞争，不影响大多数应用。叠氮钠（0.09%）作为防腐剂，使用HRP二抗时需注意去除。

二、免疫原与特异性

本抗体的表位定位于人DDB1蛋白的C末端区域（第1100至1140位氨基酸）。通过固相载体上固定的特异性表位进行亲和纯化，确保抗体识别天然及变性的DDB1。经内部验证，该抗体可检测人源和小鼠源DDB1，不与其他DDB复合物组分（如DDB2）或Cul4复合物中其他蛋白发生显著交叉反应。实际实验中建议以阳性对照（如HEK293或HeLa细胞裂解液）确认信号。DDB1分子量约为127 kDa，在WB中呈现为清晰条带。

三、推荐应用与实验条件

以下稀释度均为起始推荐范围，用户需根据具体实验体系进行优化。

1. 免疫印迹（Western Blot, WB）

稀释度：1:2000 – 1:10,000  

封闭液及抗体稀释液：5%脱脂奶粉-TBST（Tris缓冲盐水+0.1% Tween-20）  

孵育条件：一抗4°C孵育过夜（推荐）  

二抗推荐：  

常规细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体，如货号A120-101P。  

免疫沉淀后WB：为避免变性IP产物中重链（~55 kDa）信号干扰，推荐使用抗兔IgG轻链特异性HRP标记二抗，并在封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景。  

阳性对照：HEK293、HeLa或小鼠胚胎成纤维细胞裂解液。DDB1表达广泛，几乎在所有细胞系中均可检测。

2. 免疫组织化学（IHC）

稀释度：1:500 – 1:2000  

抗原修复：对FFPE（福尔马林固定、石蜡包埋）组织切片，必须使用pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复。  

推荐对照：使用兔IgG同型对照作为阴性对照，以阳性组织（如皮肤、肝脏、多种肿瘤组织）确认染色特异性。DDB1主要定位于细胞核。  

检测系统：适用于显色法（DAB）或荧光法IHC。

3. 免疫沉淀（IP）

用量：6 ?g抗体 / mg总蛋白裂解液（因浓度200 ?g/mL，相当于30 ?L抗体/mg裂解液，请相应调整体积）  

操作建议：  

裂解液推荐使用非变性裂解缓冲液（如NP-40或RIPA，避免高浓度SDS），以维持DDB1与Cul4复合物及底物的相互作用。  

孵育条件：4°C旋转孵育2小时或过夜。  

使用Protein A/G琼脂糖或磁珠捕获免疫复合物。  

洗脱后通过WB检测，务必使用抗兔IgG轻链特异性二抗以避免重链干扰。  

阳性对照：过表达DDB1的细胞裂解液或内源性表达较高的细胞（如HeLa、HEK293）。

> 注：本产品未验证用于ICC-IF，用户需自行探索。

四、产品特性与质量控制

纯化工艺：采用表位特异性亲和纯化，较常规蛋白A/G纯化特异性更高，降低非特异性背景。C末端表位（1100-1140）的选择避免了与DDB2或其他WD40重复蛋白的同源区，提升靶向性。  

浓度与效价：浓度为200 ?g/mL，虽然较其他产品（1000 ?g/mL）低，但WB推荐稀释比仍达1:2000~1:10,000，意味着每微升抗体可制备2-10 mL工作液，性价比良好。  

缓冲液优化：含0.1% BSA，可稳定低浓度抗体，减少管壁吸附，同时降低IHC和WB中的非特异性背景。  

功能验证：每批抗体均通过WB检测多种细胞裂解液中的内源性DDB1（~127 kDa），确认单一条带正确。同时通过IP验证其捕获内源性DDB1及CRL4复合物的能力。  

批次间一致性：生产记录完整，遵循内部QC标准，符合ISO 9001质量管理体系（母公司Fortis Life Sciences）。  

五、储存与稳定性

储存温度：2–8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性、效价下降。  

运输条件：湿冰运输，收货后请立即按上述温度保存。  

分装建议：由于浓度较低且含BSA，不建议进一步稀释分装；原瓶保存即可，避免污染。  

有效期：自收货之日起1年。过期产品可能信号减弱，建议重新订购。