兔抗人磷酸化RPA32（S4/S8）多克隆抗体：精准追踪DNA损伤诱导的复制胁迫应答

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl推出的兔抗人磷酸化RPA32（S4/S8）多克隆抗体（货号：A300-245A），特异性识别DNA修复与复制关键蛋白——RPA复合物中32 kDa亚基（RPA2）在丝氨酸4/8位点的双磷酸化修饰。该抗体经严格验证，适用于多种实验应用，是研究DNA损伤应答（DDR）、细胞周期检查点及复制胁迫响应的核心工具。

二、产品规格与质量参数

项目 | 规格

靶标 | RPA32 磷酸化（Ser4/Ser8）

验证种属 | 小鼠、人类

宿主/克隆性 | 兔多克隆（Whole IgG）

免疫原 | 覆盖人RPA2蛋白（NP_002937）第4/8位磷酸化丝氨酸的双磷酸化合成肽

纯化方式 | 抗原亲和纯化（固定化多肽柱）

浓度 | 1000 ?g/mL（A280法测定，1 mg/mL IgG吸光系数1.4）

缓冲体系 | Tris-柠檬酸-磷酸盐缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮化钠（防腐剂）

储存条件 | 2~8°C（请勿冷冻）

有效期 | 自收货之日起1年

三、应用与推荐稀释比例

应用体系 | 推荐稀释/使用浓度 | 关键操作备注

免疫细胞化学/免疫荧光（ICC-IF） | 1:500 ~ 1:5,000 | 适用于固定细胞染色

免疫组织化学（IHC） | 1:500 ~ 1:2,000 | 推荐使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复（适用于FFPE切片）

免疫沉淀（IP） | 6 ?g/mg 总蛋白裂解液 | 每mg裂解物使用6 ?g抗体

蛋白免疫印迹（WB） | 1:2,000 ~ 1:10,000 | 封闭液/抗体稀释液：5% Milk-TBST；一抗孵育过夜（4°C）

WB（IP后检测） | 按WB范围 | 二抗推荐抗兔IgG轻链HRP偶联物，封闭液中加5%正常猪血清以减少重链干扰

WB（细胞裂解液直接检测） | 按WB范围 | 二抗可用抗兔IgG重+轻链抗体（如A120-101P）

四、靶点生物学背景

RPA（复制蛋白A）是一个异源三聚体复合物（RPA70/RPA32/RPA14），在DNA代谢中发挥核心作用：

DNA错配修复（MMR）：与MSH2、MLH1、PCNA及DNA聚合酶δ协同完成修复；

DNA损伤应答：RPA32亚基在S期进入及DNA损伤发生后，被ATM、ATR、DNA-PK等激酶磷酸化（尤其S4/S8位点），是激活检查点信号和招募修复因子的关键事件。

五、别名

REPA2；replication factor A protein 2；replication protein A 32 kDa subunit；replication protein A 34 kDa subunit；RF-A protein 2；RP-A p32；RP-A p34；RPA32

六、使用与储存注意事项

避免反复冻融：本品为液体形式，请于2~8°C持续保存，切勿冷冻。

防腐剂提示：缓冲液含0.09%叠氮化钠，进行活细胞实验或体内应用前请透析去除。

批次间差异：多克隆抗体可能存在批次间效价差异，建议新批次首次使用前进行滴定优化。

阳性对照推荐：喜树碱或紫外线照射处理的HeLa细胞裂解液（诱导RPA32磷酸化）可作为WB阳性对照。

*本手册信息基于出厂批次验证数据，具体实验条件可能因样本类型及实验室环境而异，建议用户根据实际体系进行预实验优化。