兔抗RIF1亲和纯化抗体，适用于复制时序调控、端粒稳态及53BP1介导的修复通路选择研究

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗RIF1多克隆抗体（货号：A300-568A），采用表位特异性亲和纯化工艺制备，以完整IgG形式提供。该抗体针对人RIF1蛋白第1425至1450位氨基酸之间的表位设计，能够特异性识别全长RIF1，适用于人源样本的免疫检测。RIF1（Rap1相互作用因子1）是DNA损伤应答和端粒稳态维持的关键调控蛋白，参与ATM/ATR介导的信号通路，在S期检查点控制及双链断裂修复中发挥核心作用。本抗体经验证适用于IHC、IP及WB等多种应用。

核心规格参数

参数 | 具体信息

靶标 | RIF1

反应种属 | 人

应用 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原 | RIF1第1425至1475位氨基酸（核心表位位于1425-1450）

亚型 | IgG

标记物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

储存 | 2 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

储存与稳定性

储存温度：2 8 °C

有效期：1年

缓冲体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），含0.09%叠氮化钠

叠氮化钠作为防腐剂存在。在使用HRP标记二抗进行检测时，需注意叠氮化钠对过氧化物酶的抑制作用。如需进行细胞活性实验或功能性研究，建议通过透析或超滤去除叠氮化钠。

推荐应用与稀释度

以下为经过验证或推荐的应用条件：

应用类型 | 推荐稀释度/用量 | 关键条件

免疫组织化学（IHC） | 1:500 1:2,000 | 推荐使用柠檬酸盐缓冲液pH 6.0进行抗原修复（FFPE切片）

免疫沉淀（IP） | 6 ?g/mg裂解物 | 每毫克总蛋白裂解液使用6 ?g抗体

蛋白质印迹（WB） | 1:10,000 1:25,000 | 推荐使用3-8% Tris-醋酸凝胶；5% Milk-TBST封闭和稀释

RIF1的核心生物学功能

RIF1最初在酵母中被鉴定为端粒结合蛋白RAP1的相互作用因子，参与端粒长度调控。在人细胞中，RIF1的功能已扩展至多个DNA代谢领域：

1. DNA双链断裂修复调控

RIF1是ATM和ATR介导的DNA损伤应答通路的关键下游效应因子。在发生双链断裂（DSB）后，RIF1迅速被招募至损伤位点形成核内焦点。这一过程完全依赖于ATM激酶活性——ATM磷酸化RIF1或其上游调控蛋白，促进RIF1的损伤位点定位。

2. 53BP1通路的效应因子

RIF1与53BP1协同作用，在G1期促进DNA末端连接（经典非同源末端连接，c-NHEJ），同时抑制同源重组修复。RIF1通过调控修复通路选择，对基因组稳定性维持至关重要。

3. 复制时序调控

RIF1参与调控DNA复制的时空程序。它影响复制起点的激活时序，确保基因组的不同区域在S期正确的时间段完成复制。RIF1缺失导致复制时序紊乱，基因组不稳定性增加。

4. 端粒稳态维持

在端粒功能失调时，RIF1定位于端粒末端，参与端粒保护及端粒延长替代机制（ALT）的调控。

疾病相关性

肿瘤发生：RIF1在多种癌症中表达异常，其过表达或缺失均可导致基因组不稳定，促进肿瘤进展

化疗耐药：RIF1通过促进NHEJ修复，参与肿瘤细胞对DNA损伤性化疗药物（如PARP抑制剂、铂类药物）的抵抗

发育异常：RIF1功能缺陷与胚胎致死及发育异常相关

常见问题与解决方案

问题 | 可能原因 | 建议措施

WB无270 kDa条带 | 凝胶体系不适用于大蛋白 | 更换为3-8% Tris-醋酸凝胶；使用大蛋白专用转印条件

出现多条非预期条带（~150-200 kDa） | RIF1降解或非特异性结合 | 使用新鲜制备的裂解液，添加广谱蛋白酶抑制剂混合物；提高一抗稀释度至1:20,000

IP下拉产物中RIF1信号弱 | RIF1分子量大，洗脱/转印效率低 | 增加IP抗体用量至10 ?g/mg；洗脱后上样前不离心；使用大蛋白WB条件

IHC无核染色 | 抗原修复不当或组织固定过度 | 确保柠檬酸盐缓冲液pH 6.0用于热修复；尝试使用蛋白酶K消化作为替代方案；缩短固定时间

IHC焦点状染色无法观察 | 未对细胞施加DNA损伤处理 | RIF1在正常细胞中为弥散核染色，DNA损伤处理后出现点状焦点

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