兔抗KIF18A抗体亲和纯化，适合功能复合物分析与互作蛋白鉴定

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗KIF18A多克隆抗体（货号：A301-080A），采用表位特异性亲和纯化工艺制备，以完整IgG形式提供。该抗体针对人KIF18A蛋白C端区域（第848位氨基酸至C末端，即第898位）设计，能够特异性识别全长KIF18A，适用于人源样本的免疫检测。KIF18A是驱动蛋白超家族成员之一，作为微管解聚酶，在有丝分裂纺锤体组装、染色体整列及纺锤体 equator 定位中发挥关键调控作用。本抗体经验证适用于IP及WB应用，是研究细胞周期、有丝分裂进程及肿瘤增殖机制的重要工具。

核心规格参数

参数 | 具体信息

靶标 | KIF18A

反应种属 | 人

应用 | IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原 | 第848位至C末端（第898位）

亚型 | IgG

标记物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

储存 | 2 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

储存与稳定性

储存温度：2 8 °C

有效期：1年

缓冲体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），含0.09%叠氮化钠

叠氮化钠作为防腐剂存在。在使用HRP标记二抗进行检测时，需注意叠氮化钠对过氧化物酶的抑制作用。如需进行细胞活性实验或功能性研究（如抗体显微注射），必须通过透析或超滤去除叠氮化钠。

推荐应用与稀释度

以下为经过验证的应用条件：

应用类型 | 推荐稀释度/用量 | 关键条件

免疫沉淀（IP） | 6 ?g/mg裂解物 | 每毫克总蛋白裂解液使用6 ?g抗体

蛋白质印迹（WB） | 1:2,000 1:10,000 | 5% Milk-TBST封闭和稀释，一抗孵育过夜

特别说明：本抗体未经IHC或ICC测试验证。如需用于免疫染色，建议自行优化或选择已验证的替代产品。

KIF18A生物学背景与应用价值

KIF18A在有丝分裂中的核心功能

驱动蛋白超家族包含40余种KIF马达蛋白，沿微管参与细胞内运输。KIF18A属于驱动蛋白-8家族，其独特之处在于微管解聚酶活性，而非传统驱动蛋白的运输功能。

1. 染色体整列（Chromosome Congression）

KIF18A定位于纺锤体微管的正端，通过调控微管动态不稳定性，限制染色体在纺锤体 equatorial plate 的过度摆动，确保染色体正确整列。KIF18A缺失导致染色体不能正常排列在中期板，出现滞后染色体和多极分裂。

2. 纺锤体长度调控

KIF18A通过持续去聚合纺锤体微管，限制纺锤体的长度。这一功能确保了染色体在合适距离内被微管捕获和排列。

3. 有丝分裂检查点适应性

KIF18A参与纺锤体组装检查点（SAC）的沉默过程。当所有染色体正确整列后，KIF18A活性有助于解除SAC，促进后期的启动。

4. 与磷酸化调控的关联

KIF18A的别名PPP1R99提示其可作为蛋白磷酸酶1（PP1）的调控亚基。通过PP1募集，KIF18A可能参与去磷酸化事件，调控有丝分裂底物。

疾病及治疗相关性

肿瘤过表达：KIF18A在多种实体肿瘤（乳腺癌、结直肠癌、肝癌、卵巢癌、胶质瘤）中显著上调，高表达与患者不良预后及化疗耐药相关。

抗有丝分裂药物靶点：由于KIF18A在有丝分裂中的关键作用，且正常组织与增殖组织表达差异明显，KIF18A已成为新型抗有丝分裂药物开发的潜在靶点（规避传统紫杉烷类药物对微管的非特异性毒副作用）。

着丝粒/动粒功能研究：KIF18A功能缺陷导致染色体不稳定（CIN），是肿瘤遗传异质性的驱动因素之一。

实验操作注意事项

1. 细胞周期同步化优化：KIF18A表达具有细胞周期依赖性，在G2/M期（尤其是M期）表达最高。如需检测内源KIF18A，建议使用双胸腺嘧啶阻断或诺考达唑同步化后释放收集有丝分裂细胞，以提高检测灵敏度。

2. 使用前处理：轻柔混匀，避免剧烈振荡。长期保存后可能出现微量沉淀，建议12,000 × g离心2分钟去除聚集物。

3. 稀释液选择：WB必须使用5% Milk-TBST。避免使用BSA作为封闭剂，某些批次的BSA可能含有IgG，但不影响本体系，但Milk效果更佳。

4. 叠氮化钠处理：如需将抗体用于细胞显微注射或功能性抑制实验，必须通过透析或超滤去除叠氮化钠。否则仅限用于固定或裂解后的样本检测。

5. 分装建议：由于有效期仅为1年，建议收到后分装为10-20 ?l/管，储存于2-8°C，严禁冷冻。

6. 微管互作研究注意事项：如计划研究KIF18A与微管的结合，裂解液中需添加微管稳定剂（如紫杉醇10 ?M、GTP 1 mM）和去聚合抑制剂。常规裂解液（含0.5% NP-40）会使微管解聚，导致KIF18A从微管上释放。

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