兔抗FUS抗体亲和纯化，单次实验抗体消耗极低

一、产品概述

本文介绍由艾美捷Bethyl Laboratories推出的一款针对人FUS（融合肉瘤蛋白）的兔多克隆抗体，产品编号A300-294A。该抗体特异性识别FUS蛋白第476位至C端（第526位）之间的表位，经抗原亲和纯化后以完整IgG形式提供，未偶联标记物。已验证反应种属为人及小鼠，推荐应用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）。

FUS是一种多功能RNA结合蛋白，参与剪接体组装、前体mRNA剪接、DNA修复、转录调控及同源重组等关键细胞过程。FUS基因融合与多种肿瘤（脂肪肉瘤、白血病、组织细胞瘤、肉瘤）相关，其突变也与神经系统疾病（如肌萎缩侧索硬化症ALS）密切相关。可靠的特异性抗体对于研究FUS在肿瘤发生及神经退行性疾病中的机制具有重要意义。

二、详细规格参数

参数 | 信息

靶标 | FUS（FUS RNA binding protein）

反应种属 | 小鼠、人

应用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第476位至C端之间

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

免疫原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

存储条件 | 2–8 °C

有效期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

三、抗原表位与生产信息

该抗体识别的人FUS表位位于第500–526残基之间的C端区域，参考序列号为SwissProt P35637（GeneID 2521）。免疫原对应第476位至C端。

选择C端区域作为免疫原具有明确优势：FUS包含多种功能结构域（N端的富含谷氨酰胺/丝氨酸/酪氨酸的Q/S/Y-rich结构域、RNA识别基序、锌指结构、C端的富含精氨酸/甘氨酸的RGG box）。C端RGG结构域参与RNA结合和蛋白-蛋白相互作用，该区域在多克隆抗体设计中可作为特异性识别位点，同时避免了与EWSR1、TAF15等高度同源家族成员的全长交叉反应。

纯化工艺采用固相载体固定的表位特异性亲和层析，仅富集针对该C端表位的高亲和力IgG分子。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处的吸光度为1.4）。

四、应用方法与推荐条件

4.1 免疫印迹（WB）

推荐稀释比：1:10,000 至 1:50,000（极宽范围）

通用条件：

封闭液及抗体稀释液：含5%脱脂牛奶的TBST

一抗孵育：4°C过夜

细胞裂解液WB二抗：山羊抗兔IgG（重链+轻链）HRP抗体（货号A120-101P）

免疫沉淀产物WB二抗：抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（S100-020）

样品制备建议：

FUS分子量约75 kDa（预测值），实际因磷酸化等修饰可能迁移至70–80 kDa。

使用人或小鼠细胞裂解液（如HeLa、HEK293T、NIH/3T3）作为阳性对照。FUS在多种细胞系中普遍高表达。

推荐上样量：10–20 ?g总蛋白/泳道（FUS丰度较高，可适当减少上样量避免过曝）。

转印与曝光：

使用PVDF或硝酸纤维素膜。转膜效率可通过丽春红染色确认。

由于稀释比高达1:10,000–1:50,000，抗体用量极少，建议配合高灵敏度ECL底物。曝光时间通常为30秒至2分钟即可获得清晰条带。

灵敏度说明：极宽的工作稀释范围与产品的高亲和力相符，可实现超灵敏检测。首次实验建议从1:10,000开始，根据信号强度适当稀释至1:30,000或1:50,000。

4.2 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释比：1:1,000 至 1:10,000

抗原修复：推荐使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0） 进行热诱导表位修复（HIER）。可采用微波或高压锅加热至95–100°C，持续10–15分钟。

样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的人或小鼠组织切片。

检测步骤建议：

1. 脱蜡水化后，使用3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶。

2. 抗原修复后，以5%正常山羊血清封闭30分钟。

3. 一抗4°C孵育过夜或室温孵育1–2小时（推荐1:5,000起始）。

4. 使用HRP标记的二抗及DAB显色系统检测。

对照设置：

阳性对照：人脂肪肉瘤组织（已知FUS融合阳性）或正常脑组织神经元细胞核。

阴性对照：使用同型IgG或未免疫兔血清替代一抗。

4.3 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 蛋白裂解液

根据抗体浓度1000 ?g/ml换算，6 ?g对应6 ?l抗体。操作流程如下：

1. 细胞裂解：使用温和裂解缓冲液（如含0.5% NP-40、150 mM NaCl、50 mM Tris-HCl pH 7.4，添加蛋白酶及磷酸酶抑制剂），保留RNA结合活性。

2. 预清除：裂解液与蛋白A/G琼脂糖珠及1 ?g同型兔IgG孵育1小时。

3. 免疫沉淀：预清除上清中加入6 ?g A300-294A抗体，4°C旋转孵育2小时或过夜。

4. 捕获：加入20–30 ?l蛋白A/G珠，继续孵育1–2小时。

5. 洗涤：使用裂解缓冲液洗涤3–5次。

6. 洗脱：加入2× SDS上样缓冲液（含DTT），煮沸5–10分钟，离心后取上清进行WB检测。

IP产物WB检测注意事项：必须使用抗兔IgG轻链HRP二抗（而非普通抗兔IgG H+L），并在封闭液中添加5%正常猪血清，以避免重链（55 kDa）干扰FUS（75 kDa）的检测。

五、储存与稳定性

未稀释抗体必须储存于2–8°C，严禁冷冻。冷冻会导致兔IgG聚集和活性丧失。在推荐条件下，自收货之日起可稳定保存1年。

缓冲液中含有0.09%叠氮化钠作为防腐剂。若用于IHC或IP，叠氮化钠不影响实验；但若IP产物拟用于活细胞功能或质谱分析，需通过脱盐柱或透析去除。分装建议：无需分装，原瓶冷藏即可；若频繁取用，注意无菌操作。