山羊抗RENT1抗体亲和纯化，超灵敏检测，大幅节省抗体用量

一、产品概述

本文介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人RENT1（又称UPF1）的山羊多克隆抗体，产品编号A300-038A。该抗体特异性识别RENT1蛋白第1079位至C端（第1118位）之间的表位，经抗原亲和纯化后以完整IgG形式提供，未偶联标记物。已验证反应种属为人及小鼠，推荐应用于免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）。

RENT1（Regulator of Nonsense Transcripts 1）是无义介导的mRNA降解（NMD）通路的关键调控因子，作为ATP依赖的RNA解旋酶参与异常转录本的清除。可靠的特异性抗体对于研究NMD机制、RNA质量控制及相关疾病（如遗传病中的无义突变逃逸）至关重要。

二、详细规格参数

参数 | 信息

靶标 | RENT1（UPF1）

反应种属 | 小鼠、人

应用 | IP, WB

宿主 | 山羊

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第1079位至C端之间

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

免疫原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

存储条件 | 2–8 °C

有效期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

三、抗原表位与生产信息

该抗体识别的人RENT1（UPF1）表位位于第1075–1118残基之间的C端区域，参考序列号为NP_002902.2（GeneID 5976）。免疫原对应第1079位至C端。

选择C端区域作为免疫原的策略具有明确优势：UPF1的N端富含半胱氨酸/组氨酸区域（锌指样结构）及中央解旋酶核心结构域在多种物种中高度保守，而C端区域相对独特，有助于降低与其它RNA解旋酶家族成员的交叉反应。

纯化工艺采用固相载体固定的表位特异性亲和层析，仅富集针对该C端表位的高亲和力IgG分子。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处的吸光度为1.4）。

四、应用方法与推荐条件

4.1 免疫印迹（WB）

推荐稀释比：1:10,000 至 1:25,000（极宽范围）

通用条件：

封闭液及抗体稀释液：含5%脱脂牛奶的TBST

一抗孵育：4°C过夜

检测二抗：驴抗山羊IgG（重链+轻链）HRP偶联抗体（货号A50-101P）

样品制备建议：

UPF1分子量约124–130 kDa（受磷酸化修饰影响），建议使用6–8% SDS-PAGE或3–8% Tris-乙酸酯凝胶以获得良好分辨率。

使用人或小鼠细胞裂解液（如HeLa、HEK293T、NIH/3T3）作为阳性对照。已知UPF1广泛表达于各种细胞系。

推荐上样量：20–40 ?g总蛋白/泳道。

转印与曝光：

转膜使用PVDF膜（预先甲醇活化）或0.45 ?m硝酸纤维素膜。

由于稀释比极高（1:10,000起步），UPF1表达丰度中等，建议使用高灵敏度ECL底物。曝光时间可从30秒至10分钟调整。

注意事项：

该抗体检测的是C端表位，因此对于UPF1的C端截短突变体可能无法识别，需结合实验设计判断。

验证种属：已确认人和小鼠，对于大鼠或其他物种需自行测试。

4.2 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 蛋白裂解液

根据抗体浓度1000 ?g/ml换算，6 ?g对应6 ?l抗体。操作流程如下：

1. 细胞裂解：建议使用非变性裂解缓冲液（如含0.5% NP-40、150 mM NaCl、50 mM Tris-HCl pH 7.4，添加蛋白酶及磷酸酶抑制剂），保留RNA结合活性。

2. 预清除：裂解液与10 ?l蛋白G琼脂糖珠及1 ?g同型山羊IgG孵育1小时，离心去除非特异性结合。注意：山羊抗体对蛋白G亲和力高，推荐使用蛋白G而非蛋白A。

3. 免疫沉淀：预清除后的上清中加入6 ?g A300-038A抗体，4°C旋转孵育2小时或过夜。

4. 捕获：加入20–30 ?l蛋白G琼脂糖珠，继续孵育1–2小时。

5. 洗涤：使用裂解缓冲液洗涤珠子3–5次，可逐渐提高盐浓度（至300 mM NaCl）降低背景。

6. 洗脱：加入2× SDS上样缓冲液（含DTT），煮沸5–10分钟，离心后取上清进行WB检测。

IP产物WB检测的特殊注意事项：

由于IP使用山羊一抗，WB检测时二抗推荐使用驴抗山羊IgG（H+L）HRP（A50-101P）。若担心重链干扰（约55 kDa），可选用抗山羊IgG轻链特异性HRP二抗，但说明书中未强制要求，因山羊抗体的重链与目标UPF1（124 kDa）距离较远，干扰较小。

4.3 关于物种兼容性的补充

本抗体可用于小鼠样本。建议使用小鼠成纤维细胞（如NIH/3T3）或小鼠胚胎干细胞裂解液作为阳性对照。小鼠UPF1与人UPF1的C端区域高度保守（根据序列比对，同源性约95%），因此预期可良好识别。

五、储存与稳定性

未稀释抗体必须储存于2–8°C，严禁冷冻。冷冻会导致山羊IgG聚集和活性丧失。在推荐条件下，自收货之日起可稳定保存1年。

缓冲液中含有0.09%叠氮化钠作为防腐剂。若后续IP产物拟用于活细胞功能实验或质谱分析，需通过脱盐柱或透析去除叠氮化钠。分装建议：无需分装，原瓶冷藏；若需长期频繁使用，可无菌分装至低蛋白吸附管中，但仍需冷藏，不可冻存。