兔抗WDR5抗体亲和纯化，双平台验证，简化表观遗传复合物分析

一、产品概述

本文介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人WDR5（WD重复结构域蛋白5）的兔多克隆抗体（货号：A302-429A）。该抗体特异性识别WDR5蛋白第1–50位氨基酸之间的N端表位，经抗原亲和纯化后以完整IgG形式提供，未偶联标记物。已验证反应种属为人，推荐应用于免疫组织化学（IHC）及免疫沉淀（IP）。

WDR5是组蛋白H3赖氨酸4甲基转移酶复合物（MLL和SET1复合物）的核心亚基，通过介导蛋白质相互作用参与染色质修饰与基因转录调控。可靠的特异性抗体对于研究表观遗传调控机制及药物靶点验证具有重要意义。

二、详细规格参数

参数 | 信息

靶标 | WDR5（WD repeat domain 5）

反应种属 | 人

应用 | IHC, IP

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第1–50位氨基酸之间的区域

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

免疫原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

存储条件 | 2–8 °C

有效期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

三、抗原表位与生产信息

该抗体识别的人WDR5表位位于第1–50残基之间的N端区域，参考序列号为NP_060058.1（GeneID 11091）。免疫原对应此N端区段。

纯化工艺采用固相载体固定的表位特异性亲和层析，仅富集针对该N端表位的高亲和力IgG分子，有效降低非特异性背景。由于WDR5含有7个WD重复结构域（该结构域在多种蛋白质中保守），选择N端独特区域作为免疫原显著减少了与其它WD重复蛋白的交叉反应。

免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处的吸光度为1.4）。

四、应用方法与推荐条件

4.1 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释比：1:500 至 1:2000

抗原修复：建议使用Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）进行热诱导表位修复（HIER）。可采用高压锅或微波加热法，确保修复温度达到95–100°C持续10–20分钟。

样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的人组织切片。

检测步骤建议：

1. 脱蜡水化后，使用3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶。

2. 抗原修复后，以5%正常山羊血清封闭30分钟。

3. 一抗4°C孵育过夜或室温孵育1–2小时。

4. 使用HRP标记的二抗及DAB显色系统检测。

对照设置：

阳性对照：推荐使用已知WDR5高表达的人组织（如睾丸、胚胎肾或多种癌细胞系来源的组织芯片）。

阴性对照：使用同型IgG或未免疫兔血清替代一抗。

4.2 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 蛋白裂解液

根据抗体浓度1000 ?g/ml换算，6 ?g对应6 ?l抗体。操作流程如下：

1. 裂解细胞：使用非变性裂解缓冲液（如含0.5% NP-40的TBS或PBS，添加蛋白酶抑制剂）。

2. 预清除：裂解液与10 ?l蛋白A/G琼脂糖珠及1 ?g同型IgG孵育1小时，离心去除非特异性结合物。

3. 免疫沉淀：预清除后的上清中加入6 ?g A302-429A抗体，4°C旋转孵育2小时或过夜。

4. 捕获：加入20–30 ?l蛋白A/G珠，继续孵育1–2小时。

5. 洗涤：使用裂解缓冲液洗涤珠子3–5次。

6. 洗脱：加入2× SDS上样缓冲液，煮沸5分钟，离心后取上清进行WB检测。

WB检测IP产物的特殊注意事项：

生产说明书指出，免疫沉淀产物的Western Blot检测应使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）。这一措施避免二抗与IP一抗的重链（约55 kDa）结合产生干扰条带，确保清晰检测目标蛋白（WDR5分子量约36 kDa）。

4.3 关于Western Blot的说明

虽然产品说明书中包含WB通用操作描述（5%牛奶-TBST，一抗过夜），但该抗体在应用的官方列表中仅包含IHC和IP。用户若尝试用于WB，需自行验证。根据经验，WDR5分子量约36 kDa，若需WB检测，建议从1:500稀释比开始，并设置过表达或敲低样本作为对照。

五、储存与稳定性

未稀释抗体必须储存于2–8°C，严禁冷冻。冷冻会导致IgG聚集和活性丧失。在推荐条件下，自收货之日起可稳定保存1年。

缓冲液中含有0.09%叠氮化钠作为防腐剂。若用于IHC或IP，叠氮化钠不影响实验，但若需将IP产物用于后续质谱或细胞功能实验，建议通过脱盐柱去除。分装建议：无需分装，直接使用原液即可；若频繁取用，确保操作无菌。