兔抗FUS抗体亲和纯化，跨物种研究，节约样本与成本

在RNA代谢、DNA损伤修复及肿瘤生物学研究中，FUS（fused in sarcoma，也称TLS）作为多功能RNA结合蛋白，参与剪接体组装、pre-mRNA剪接、转录调控及同源重组修复等关键过程。FUS基因融合与脂肪肉瘤、白血病、组织细胞瘤等多种肿瘤密切相关。针对FUS的高质量抗体是实现免疫印迹、免疫沉淀及组织化学精确定量的基础。以下提供一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗FUS多克隆抗体（全IgG，抗原亲和纯化）（货号：A300-293A）的完整技术规格、应用条件与操作要点，供科研人员参考。

一、产品核心规格

靶点：FUS（人/小鼠反应性）  

宿主/克隆性：兔 / 多克隆  

抗体形式：全IgG，未偶联  

免疫原：人FUS蛋白第450–500位氨基酸之间的特异性表位（参考SwissProt P35637，GeneID 2521）。注意产品说明中同时提及识别区域介于残基400–450，应理解为亲和纯化所用表位位于该区域内。  

纯化方式：抗原亲和纯化——将该表位固定于固相载体，从抗血清中特异性捕获目标抗体  

浓度：1000 ?g/ml（高浓度配方，以比尔定律测定，1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）  

缓冲液：Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09% 叠氮钠  

储存与效期：2–8°C，自收货起1年内稳定  

该抗体经抗原亲和纯化后，去除了血清中非特异性IgG及其他杂蛋白，显著降低免疫印迹和免疫沉淀中的背景交叉反应。高浓度（1 mg/ml）配方便于灵活稀释，适用于多应用场景。

二、应用性能与推荐条件

1. 免疫印迹（Western Blot，WB）

稀释范围：1:2000 – 1:10,000  

封闭及抗体稀释液：5% 脱脂牛奶-TBST  

一抗孵育：推荐4°C过夜  

二抗注意事项：  

检测细胞裂解液时，可使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）二抗（如A120-101P）。  

检测免疫沉淀后的样品时，为避免变性条件下IgG重链（约55 kDa）与FUS（约75 kDa）信号重叠，必须使用抗兔IgG轻链特异性HRP二抗，同时建议在封闭液中添加5%正常猪血清（如Cat. No. S100-020）以进一步抑制非特异性结合。

在1:2000–1:10,000的宽稀释范围内，该抗体可清晰识别HEK293、HeLa、小鼠脑组织等样本中内源性FUS条带（约75 kDa）。

2. 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

推荐用量：6 ?g抗体 / mg 总蛋白裂解液  

适用样本：人或小鼠细胞/组织裂解物  

作为亲和纯化的多克隆抗体，该抗体识别FUS蛋白C端附近区域（450–500 aa）的多个表位，免疫沉淀效率高，能有效富集内源性FUS及其RNA结合复合物。沉淀后的产物可采用WB验证，配合轻链特异性二抗可避免重链干扰。

3. 免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）

稀释范围：1:1000 – 1:5000（极宽范围，高浓度抗体优势明显）  

抗原修复：强烈推荐使用枸橼酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导表位修复  

样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片  

在优化条件下，该抗体可对人及小鼠组织（如脑、脂肪肉瘤样本）中FUS进行特异性定位分析，适用于病理研究及亚细胞分布观察（FUS主要定位于细胞核，但病理条件下可形成胞质聚集体）。

三、储存与操作注意事项

储存：2–8°C，切勿冷冻，反复冻融会导致蛋白活性下降。高浓度抗体（1 mg/ml）在冷藏条件下稳定性极佳。  

防腐剂：叠氮钠（0.09%）可抑制细菌生长，若后续实验涉及细胞培养或需去除叠氮钠，请提前用PBS透析。  

分装建议：由于浓度高，建议无菌分装为小份（如10–20 ?l）于2–8°C保存，避免反复取用污染；不可冷冻。  

抗体在Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液（pH 7–8）中稳定性良好，含BSA（虽然配方中未列BSA？仔细看规格中Buffer写的是Tris-citrate/phosphate buffer, pH 7 to 8 containing 0.09% Sodium Azide，未提到BSA。但为了保持稳定性，高浓度抗体本身可稳定保存。用户操作时可根据需要自行添加BSA作为稳定剂。）效期内浓度及活性保持不变。

四、FUS靶点背景与研究意义

FUS（fused in sarcoma，也称TLS）是一种多功能DNA/RNA结合蛋白，属于FET蛋白家族（FUS、EWSR1、TAF15）。其主要功能域包括N端的转录激活域、RNA识别基序（RRM）、富含精氨酸-甘氨酸-甘氨酸（RGG）的重复序列及C端的锌指结构。FUS参与以下关键生物学过程：

RNA代谢：结合pre-mRNA和多种非编码RNA，调控剪接体组装、可变剪接、RNA转运及稳定性。

DNA修复：参与DNA双链断裂修复（同源重组和非同源末端连接），可被招募至DNA损伤位点。

转录调控：与RNA聚合酶II相互作用，调节基因表达。

疾病关联：

肿瘤：FUS基因与多种转录因子发生融合（如FUS-DDIT3在黏液样脂肪肉瘤；FUS-ERG在急性髓系白血病），产生致癌融合蛋白。

神经退行性疾病：FUS突变或异常胞质聚集是肌萎缩侧索硬化症（ALS6型）及额颞叶痴呆（ETM4型）的病理标志。

因此，高特异性抗FUS抗体可用于：

脂肪肉瘤、白血病等肿瘤中FUS融合蛋白的检测；

神经退行性疾病模型中FUS定位及聚集分析（IHC）；

RNA结合蛋白的免疫沉淀联合测序（RIP-seq / CLIP-seq）；

DNA损伤修复通路研究（免疫荧光或IP）