兔抗FANCA抗体亲和纯化，WB/IP/Flow Cyt信噪比优化显著

在DNA损伤修复与范可尼贫血（Fanconi anemia, FA）研究中，FANCA蛋白是FA核心复合物的关键组分，参与DNA链间交联损伤的修复。针对FANCA的高质量抗体对于免疫沉淀、免疫印迹及流式细胞术分析至关重要。以下提供一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗FANCA多克隆抗体（全IgG，抗原亲和纯化）（货号:A301-980A）的详细技术参数、应用条件及操作要点，供科研人员参考。

一、产品核心规格

靶点：FANCA（人反应性）  

宿主/克隆性：兔 / 多克隆  

抗体形式：全IgG，未偶联  

免疫原：人FANCA蛋白第1405–1455位氨基酸之间的特异性表位（参考序列NP_000126.2，GeneID 2175），位于C端区域  

纯化方式：抗原亲和纯化——将该表位固定于固相载体，从抗血清中特异性捕获目标抗体  

浓度：200 ?g/ml（以比尔定律测定，1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）  

缓冲液：Tris-缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09% 叠氮钠  

储存与效期：2–8°C，自收货起1年内稳定   

该抗体经抗原亲和纯化后，去除了血清中非特异性IgG及其他杂蛋白，显著降低免疫印迹和免疫沉淀中的背景交叉反应，尤其适用于检测内源性FANCA蛋白（分子量约163 kDa）。

二、应用性能与推荐条件

1. 免疫印迹（Western Blot，WB）

稀释范围：1:2000 – 1:10,000  

封闭及抗体稀释液：5% 脱脂牛奶-TBST  

一抗孵育：推荐4°C过夜  

二抗注意事项：  

检测细胞裂解液时，可使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）二抗（如A120-101P）。  

检测免疫沉淀后的样品时，为避免变性条件下IgG重链（约55 kDa）与FANCA（163 kDa）以外的非特异性条带干扰，建议使用抗兔IgG轻链特异性HRP二抗，同时可在封闭液中添加5%正常猪血清（如Cat. No. S100-020）以进一步抑制非特异性结合。

在1:2000–1:10,000的宽稀释范围内，该抗体均可清晰识别HEK293、HeLa等细胞裂解液中内源性FANCA条带。

2. 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

推荐用量：6 ?g抗体 / mg 总蛋白裂解液  

适用样本：人细胞或组织裂解物  

作为亲和纯化的多克隆抗体，该抗体识别FANCA C端区域（1405–1455）的多个表位，免疫沉淀效率高，能有效富集内源性FANCA及其复合物中的互作蛋白（如FANCG、FANCC等）。沉淀后的产物可采用WB验证，配合轻链特异性二抗可避免重链信号干扰。

3. 流式细胞术（Flow Cytometry，Flow Cyt）

推荐用量：1 ?l 抗体 / 1×10^6 个细胞  

固定与透化：4% 甲醛固定，90% 甲醇透化  

检测方式：需配合荧光标记的二抗（如Alexa Fluor 488标记的山羊抗兔IgG）进行细胞表面或胞内染色  

该条件适用于分析不同细胞周期阶段或DNA损伤刺激下FANCA蛋白的表达水平变化，亦可用于评估FA患者细胞中FANCA的缺失情况。

三、储存与操作注意事项

储存：2–8°C，切勿冷冻，反复冻融会导致蛋白活性下降。  

防腐剂：叠氮钠（0.09%）可抑制细菌生长，若后续实验涉及细胞培养或需去除叠氮钠，请提前用PBS透析。  

分装建议：若短期内使用，可直接于2–8°C保存；长期储存可无菌分装后保持冷藏，避免污染。  

抗体在含BSA的缓冲液中稳定性良好，效期内浓度及活性保持不变。

四、FANCA靶点背景与研究意义

FANCA是范可尼贫血（Fanconi anemia）互补群A的编码蛋白，属于FA通路的核心成员。FA是一种常染色体隐性遗传病，表现为先天性畸形、骨髓衰竭及高度癌症易感性。FANCA与FANCB、FANCC等其他12个互补群蛋白（FANCD1/BRCA2、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCG、FANCI、FANCJ/BRIP1、FANCL、FANCM、FANCN/PALB2）共同组装成核内复合物，该复合物在DNA链间交联损伤修复中发挥关键作用。

具体功能要点：

DNA损伤修复：FANCA是FA核心复合物的支架蛋白，负责稳定复合物并激活FANCD2单泛素化，进而启动同源重组修复。

疾病关联：FANCA基因突变是导致范可尼贫血的最常见原因（约占60-70%），患者成纤维细胞通常表现为对丝裂霉素C（MMC）等交联剂高度敏感。

肿瘤抑制：FA通路缺陷与乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌等多种肿瘤发生相关，FANCA功能丧失可导致基因组不稳定性。

因此，高特异性的抗FANCA抗体可用于：

FA患者细胞系的补群分型鉴定；

DNA损伤修复机制研究（如MMC或顺铂处理后的蛋白动态变化）；

蛋白质相互作用分析（免疫沉淀联合质谱）。