兔抗DDX3抗体亲和纯化，一抗多用，节约试验成本

在RNA代谢与肿瘤生物学研究中，DDX3（DEAD-box helicase 3, X-linked）作为一类ATP依赖的RNA解旋酶，参与前体mRNA剪接、翻译起始、RNA输出及肿瘤抑制等多个关键过程。针对该靶点的高质量抗体是开展免疫印迹、免疫沉淀及组织化学分析的必备工具。以下围绕由艾美捷Bethyl Laboratories推出的一款兔源抗DDX3多克隆抗体（全IgG，抗原亲和纯化）（货号：A300-474A）的规格特性、实验应用数据及使用要点进行系统说明，供科研人员参考。

一、产品核心规格

靶点：DDX3（人/小鼠反应性）  

宿主/克隆性：兔 / 多克隆  

抗体形式：全IgG，未偶联  

免疫原：人DDX3蛋白第1–50位氨基酸之间的特异性表位（参考序列NP_001347.2，GeneID 1654）  

纯化方式：抗原亲和纯化——将该表位固定于固相载体，从抗血清中特异性捕获目标抗体  

浓度：200 ?g/ml（以比尔定律测定，1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）  

缓冲液：Tris-缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09% 叠氮钠  

储存与效期：2–8°C，自收货起1年内稳定   

该抗体经亲和纯化后，去除了血清中非特异性IgG及其他杂蛋白，显著降低免疫印迹和免疫沉淀中的背景交叉反应，尤其适用于低丰度DDX3的检测。

二、应用性能与推荐条件

1. 免疫印迹（Western Blot，WB）

稀释范围：1:1000 – 1:10,000  

封闭及抗体稀释液：5% 脱脂牛奶-TBST  

一抗孵育：推荐4°C过夜  

二抗注意事项：  

检测细胞裂解液时，可使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）二抗（如A120-101P）。  

检测免疫沉淀后的样品时，为避免变性条件下IgG重链（约55 kDa）与DDX3（约73 kDa）信号重叠，必须使用抗兔IgG轻链特异性HRP二抗，同时建议在封闭液中添加5%正常猪血清（如Cat. No. S100-020）以进一步抑制非特异性结合。

这一策略可清晰区分目标蛋白与沉淀抗体的重轻链，避免假阴性或条带误读。

2. 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

推荐用量：6 ?g抗体 / mg 总蛋白裂解液  

适用样本：人或小鼠细胞/组织裂解物  

该抗体作为亲和纯化的多克隆抗体，可识别DDX3 N端区域的多个表位，因此免疫沉淀效率高，能有效富集内源性DDX3蛋白，后续配合轻链特异性二抗进行WB验证，结果可靠。

3. 免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）

稀释范围：1:200 – 1:1000  

抗原修复：强烈推荐使用枸橼酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导表位修复  

样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）切片  

在优化后的IHC条件下，该抗体可对人及小鼠组织中DDX3进行特异性定位分析，适用于病理切片及发育生物学研究。

三、储存与操作注意事项

储存：2–8°C，切勿冷冻，反复冻融会导致蛋白活性下降。  

防腐剂：叠氮钠（0.09%）可抑制细菌生长，但需注意若后续实验涉及细胞培养或需去除叠氮钠，请提前透析。  

分装建议：若短期不用，可无菌分装后于2–8°C保存，避免污染；不建议分装后冷冻。  

抗体在含BSA的缓冲液中稳定性良好，效期内浓度及活性保持不变。

四、DDX3靶点背景与研究意义

DDX3（亦称DDX3X、DBX、HLP2）属于DEAD-box RNA解旋酶家族，其名称来源于高度保守的Asp-Glu-Ala-Asp（DEAD）氨基酸基序。该蛋白利用ATP水解能量解开RNA二级结构，参与RNA代谢的全过程：

RNA剪接与输出：影响前体mRNA的正确加工及核质转运  

翻译调控：作为eIF4E抑制蛋白，调节翻译起始  

肿瘤抑制：转录激活p21启动子，抑制肿瘤细胞生长  

病毒感染：丙型肝炎病毒（HCV）等调控DDX3功能，其表达下调与肝细胞癌发生发展密切相关  

因此，DDX3是癌症生物学、病毒学及RNA调控领域的重要研究靶点。一款高特异性、经严格验证的抗体能够帮助研究者精准检测DDX3的表达水平、细胞内定位及相互作用蛋白。