兔抗FUS抗体亲和纯化，WB/IHC结果可靠且重现性高

一、产品概述

本产品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗FUS多克隆抗体（货号：A300-302A），经抗原亲和纯化，以全IgG形式提供，未偶联标记。该抗体特异性识别FUS蛋白（RNA结合蛋白FUS，亦称TLS），反应性涵盖小鼠和人源样本，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用。产品浓度为1000 ?g/ml，储存于2-8°C，有效期为收货后一年。

二、产品规格参数

参数 规格

靶点 FUS

反应性 小鼠、人

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 全IgG

免疫原 人FUS蛋白第1-50位残基

同型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人

浓度 1000 ?g/ml

缓冲液 Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

储存温度 2-8°C

有效期 收货后1年

三、生产工艺与质量控制

3.1 免疫原设计

本抗体识别的表位位于人FUS蛋白第1至50位残基区域（参考序列SwissProt P35637，GeneID 2521）。该区域位于FUS蛋白的N端，包含富集甘氨酸和谷氨酰胺的QGSY结构域，参与蛋白-蛋白相互作用和相分离过程。

3.2 纯化流程

采用固相载体固定的FUS表位特异性抗原进行亲和纯化，获得高纯度、低背景的抗体。抗体浓度通过比尔定律测定：1 mg/ml IgG在280 nm波长的吸光度为1.4。

3.3 质量控制

纯度：抗原亲和纯化，不含非特异性兔IgG

效价：WB推荐稀释度可达1:10,000，IHC推荐1:500-1:2,000

特异性：经人及小鼠样本验证，识别约75 kDa的FUS蛋白

四、推荐应用与实验方法

4.1 免疫印迹（Western Blot, WB）

推荐稀释度：1:2,000 - 1:10,000

4.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

推荐用量：6 ?g/mg裂解物

4.3 免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）

推荐稀释度：1:500 - 1:2,000

五、储存与稳定性

储存温度：2-8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性、聚集和效价下降。

缓冲体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

有效期：收货后1年内稳定。建议分装成单次使用量，储存于2-8°C，避免污染。

运输条件：冰袋运输。收到后请立即检查是否浑浊或沉淀。

五、使用注意事项

1. 叠氮化钠影响：缓冲液含0.09%叠氮化钠，对细胞有毒，且抑制HRP活性。若计划进行细胞培养添加实验或对IP产物进行HRP标记检测时无需去除（因WB步骤中叠氮化物被稀释），但若需偶联HRP则必须通过透析或脱盐柱去除。

2. 多克隆抗体批次差异：不同批次间可能存在效价差异，建议对大批量实验预留批次间验证环节。

3. 交叉反应性：已验证对小鼠和人FUS有反应性。其他种属（如大鼠）预期有交叉反应，但需自行验证。与EWSR1等同源蛋白的交叉反应可能性较低，但建议设阴性对照。

4. FUS的亚细胞定位：正常细胞中FUS主要定位于细胞核（核质和卡哈尔体），在DNA损伤或病理状态下可向细胞质转位。IHC和ICC实验中应观察并记录定位变化。

5. 稀释度优化：推荐稀释度为一般参考范围，实际最佳稀释度需根据样本类型和实验体系进行梯度预实验确定。WB可从1:5,000开始，IHC从1:1,000开始。

六、常见问题与解决方案

问题 可能原因 解决方案

WB出现多条带（~75 kDa附近） FUS蛋白降解（C端降解产物）；非特异性交叉反应 使用新鲜制备的裂解液并添加广谱蛋白酶抑制剂；降低一抗浓度至1:10,000

信号弱或检测不到 上样量不足；转膜效率低；FUS表达水平低（某些细胞系） 增加上样量至60 ?g；丽春红染色确认转膜；使用FUS高表达细胞（如HeLa、U2OS）

IP后WB无FUS信号 抗体用量不足；裂解条件破坏蛋白复合物 增加抗体至8-10 ?g/mg；使用温和IP裂解缓冲液（含RNase抑制剂）

IHC背景高或非特异性核染色 一抗浓度过高；抗原修复过度 降低稀释度（如1:2,000）；缩短抗原修复时间

检测到预期外分子量条带（如50 kDa） FUS融合蛋白（病理样本）或蛋白水解 确认样本是否为肿瘤组织（存在FUS融合）；使用蛋白酶抑制剂

七、相关产品推荐

产品类型 货号/名称 用途

山羊抗兔IgG（H+L） A120-101P WB二抗

抗兔IgG轻链HRP偶联物 - IP-WB检测，避免重链干扰

正常猪血清 S100-020 IP-WB封闭添加物

FUS阳性对照裂解液（HeLa） 自制或市售 WB/IHC阳性对照

柠檬酸盐抗原修复液（pH 6.0） - IHC修复

Protein A/G琼脂糖珠 - IP实验

RNase抑制剂 市售（如RNasin） IP中保护RNA相互作用

*本技术资料基于产品说明书（克隆号A300-302A等）及UniProt注释编制，具体实验条件请研究者结合样本类型和实验室平台进行优化。