兔抗SMC3抗体亲和纯化，同时适用于WB/IP/IHC覆盖染色体黏连蛋白研究全场景

一、产品概述

本产品为艾美捷Bethyl Laboratories推出兔抗SMC3多克隆抗体（货号：A300-060A），经抗原亲和纯化，以全IgG形式提供，未偶联标记。该抗体特异性识别SMC3蛋白（结构维持染色体蛋白3），反应性涵盖小鼠和人源样本，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用。产品浓度为1000 ?g/ml，储存于2-8°C，有效期为收货后一年。

二、产品规格参数

参数 规格

靶点 SMC3

反应性 小鼠、人

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 全IgG

免疫原 人SMC3蛋白第1167位至C末端（第1217位）区域

同型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人

浓度 1000 ?g/ml

缓冲液 Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

储存温度 2-8°C

有效期 收货后1年

三、生产工艺与质量控制

31 免疫原设计

本抗体识别的表位位于人SMC3蛋白第1175位至C末端（第1217位）区域（参考序列NP_005436.1，GeneID 9126）。该区域位于SMC3的C端结构域，参与二聚化及与调控蛋白的相互作用。

3.2 纯化流程

采用固相载体固定的SMC3表位特异性抗原进行亲和纯化，获得高纯度、低背景的抗体。抗体浓度通过比尔定律测定：1 mg/ml IgG在280 nm波长的吸光度为1.4。

3.3 质量控制

纯度：抗原亲和纯化，不含非特异性兔IgG

效价：WB推荐稀释度可达1:25,000，IHC推荐1:1,000-1:5,000

特异性：经人及小鼠样本验证，识别约140 kDa的SMC3蛋白

四、推荐应用与实验方法

4.1 免疫印迹（Western Blot, WB）

推荐稀释度：1:10,000 - 1:25,000

4.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

推荐用量：6 ?g/mg裂解物

4.3 免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）

推荐稀释度：1:1,000 - 1:5,000

五、储存与稳定性

储存温度：2-8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性、聚集和效价下降。

缓冲体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

有效期：收货后1年内稳定。建议分装成单次使用量，储存于2-8°C，避免污染。

运输条件：冰袋运输。收到后请立即检查是否浑浊或沉淀。

六、使用注意事项

1. 叠氮化钠影响：缓冲液含0.09%叠氮化钠，对细胞有毒，且抑制HRP活性。若计划进行细胞培养添加实验或对IP产物进行HRP标记检测时无需去除（因WB步骤中叠氮化物被稀释），但若需偶联HRP则必须通过透析或脱盐柱去除。

2. 多克隆抗体批次差异：不同批次间可能存在效价差异，建议对大批量实验预留批次间验证环节。

3. 交叉反应性：已验证对小鼠和人SMC3有反应性。预期大鼠等其他种属也有交叉反应，但需自行验证。SMC3与SMC1、SMC2等家族成员序列相似性较低，本抗体特异性良好。

4. 染色质结合特性：SMC3是染色质结合蛋白，在制备细胞裂解液时，若仅使用温和裂解缓冲液，部分SMC3可能残留在染色质沉淀中。建议对贴壁细胞进行原位裂解或使用高盐/核酸酶处理以提高提取效率。

5. 稀释度优化：推荐稀释度为一般参考范围，实际最佳稀释度需根据样本类型和实验体系进行梯度预实验确定。WB可从1:10,000开始，IHC从1:2,000开始。

七、常见问题与解决方案

问题 可能原因 解决方案

WB检测到多条带（~140 kDa附近） SMC3蛋白降解；非特异性交叉反应 使用新鲜制备的裂解液并添加广谱蛋白酶抑制剂；降低一抗浓度至1:20,000以上

信号弱或检测不到 上样量不足；转膜效率低；裂解液提取不充分 增加上样量至60-80 ?g；丽春红染色确认转膜；使用含核酸酶的高盐裂解缓冲液

IP后WB无SMC3信号 抗体用量不足；裂解条件破坏复合物 增加抗体至8-10 ?g/mg；改用温和IP裂解缓冲液（避免SDS）

IHC背景高或信号弥散 一抗浓度过高；抗原修复不充分 降低稀释度（如1:5000）；延长或增强抗原修复（改用高压修复）

八、相关产品推荐

产品类型 货号/名称 用途

山羊抗兔IgG（H+L） A120-101P WB二抗

抗兔IgG轻链HRP偶联物 - IP-WB检测，避免重链干扰

正常猪血清 S100-020 IP-WB封闭添加物

SMC3阳性对照裂解液 自制（HeLa细胞）或市售 WB/IHC阳性对照

柠檬酸盐抗原修复液（pH 6.0） - IHC修复

Protein A琼脂糖珠 - IP实验

*本技术资料基于产品说明书（克隆号A300-060A等）及UniProt注释编制，具体实验条件请研究者结合样本类型和实验室平台进行优化。