兔抗HA标签抗体亲和纯化，灵敏度与信噪比俱佳，微量样本即可检测

一、产品概述

本产品为由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗HA标签多克隆抗体（货号：A190-108A），经抗原亲和纯化，以全IgG形式提供，未偶联标记。该抗体特异性识别HA标签序列（YPYDVPDYA），不依赖于目标蛋白的种属来源，适用于酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用。产品浓度为1 mg/ml，储存于2-8°C，有效期为收货后一年。

二、产品规格参数

参数 规格

靶点 HA标签（YPYDVPDYA）

反应性 不依赖于种属

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 全IgG

同型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

浓度 1 mg/ml

缓冲液 磷酸盐缓冲液（PBS），含0.09%叠氮化钠

储存温度 2-8°C

有效期 收货后1年

三、生产工艺与质量控制

3.1 免疫原设计

免疫原为HA标签合成肽（YPYDVPDYA）与匙孔血蓝蛋白（KLH）的偶联物。KLH作为强免疫原性载体蛋白，增强了小分子多肽的免疫应答。

3.2 纯化流程

将HA标签肽固定在固相载体上，通过亲和层析从免疫兔血清中分离特异性抗体。该方法获得高纯度、低交叉反应的抗HA标签抗体。抗体浓度通过比尔定律测定：1 mg/ml IgG在280 nm波长的吸光度为1.4。

3.3 质量控制

纯度：抗原亲和纯化，不含非特异性兔IgG

效价：WB推荐稀释度可达1:30,000，ELISA可达1:30,000

特异性：经验证与HA标签融合蛋白反应，不与常用标签（如His、Myc、Flag、GST）发生交叉反应

四、推荐应用与实验方法

注意：并非所有列出的应用均经过生产实验室的正式验证，最佳工作稀释度需由研究者通过实验确定。

4.1 免疫印迹（Western Blot, WB）

推荐稀释度：1:1,000 - 1:30,000

4.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

推荐用量：1 - 4 ?g/mg裂解物

4.3 免疫细胞化学（Immunocytochemistry, ICC）

推荐稀释度：1:100 - 1:400

阳性对照：使用已知表达HA标签蛋白的细胞系（如转染pCDNA3.1-HA-目标基因的HEK293细胞）

4.4 酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）

推荐稀释度：

检测用一抗：1:1,000 - 1:30,000

包板用一抗：1:100 - 1:500（若将本抗体用作包被抗体捕获HA标签蛋白）

五、储存与稳定性

储存温度：2-8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性、聚集和效价下降。

缓冲体系：磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.2-7.4），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

有效期：收货后1年内稳定。建议分装成单次使用量（如5-10 ?l），储存于2-8°C，避免污染。

运输条件：冰袋运输。收到后请立即检查是否浑浊或沉淀。

六、使用注意事项

1.叠氮化钠影响：缓冲液含0.09%叠氮化钠，对细胞有毒且抑制HRP活性。若计划进行细胞培养添加实验或对IP产物进行HRP标记检测时无需去除（因为WB步骤中叠氮化物被稀释），但若需偶联HRP则必须通过透析或脱盐柱去除。

2.多克隆抗体批次差异：不同批次间可能存在效价差异，建议对大批量实验预留批次间验证环节。本抗体为亲和纯化，差异相对较小。

3.交叉反应性：本抗体特异性识别HA标签序列（YPYDVPDYA）。与常见的其他表位标签（Myc、Flag、His、V5、GST等）无交叉反应，但建议用户在实际样本中设置阴性和阳性对照进行验证。

4.标签位置影响：HA标签融合于目标蛋白的N端、C端或内部时，抗体的识别效率可能存在差异。若信号较弱，可尝试：

增加抗体使用浓度

延长一抗孵育时间

在变性条件下（WB）检测效果通常优于天然条件（IP、ICC），但多克隆抗体对天然表位也有良好识别能力

5.稀释度优化：推荐稀释度为一般参考范围，实际最佳稀释度需根据样本类型、实验体系和检测灵敏度进行梯度预实验确定。WB可从1:5,000开始，ICC从1:200开始，ELISA从1:10,000开始。

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*本技术资料基于产品说明书及HA标签通用实验方案编制，具体实验条件请研究者结合融合蛋白特性和实验室平台进行优化。