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PVDF 膜上蛋白的可逆染色

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-05-21     
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Western


杂交时,为确认蛋白是否转至PVDF膜上,可用下列方法对膜上蛋白进行可逆性染色。


1.氨基黑染色

染液:0.5% Amido Black (w/v), 25% isopropanol (v/v) and 10% acetic acid.

染色:将 PVDF 膜置于染液中染色数钟,ddH2O 脱色。


2.考马氏亮蓝染色

染液:0.1% Coomassie Brilliant Blue R-250 (w/v) and 50% methanol (v/v)

脱色液:40% methanol (v/v) with 10% acetic acid (v/v)

染色:将 PVDF 膜置于染液中染色 15 min.,脱色液脱色。


3.丽春红染色PonceauS

染液:0.2%w/vPonceauSininTCA(3%v/v)

染色:将 PVDF膜置于染液中染色 5min

脱色:ddH2O脱色


三、银染

PAGE 胶上蛋白质的银染方法有数百种,其原理相似,具体步骤各不相同。银染为蛋白质的非特异性染色,呈“爆炸性”反应模式,用于蛋白定量时准确性差,但其敏感度高、简便易行,仍被广泛应用。下面列举的这三种方法为常用的双向电泳凝胶染色法,可与质谱兼容。其中方法 1 敏感性最高,方法 3 背景最低 、
对比度好。


silver1.png

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注意事项:

1.应严格按照操作步骤进行;

2.显色前最好更换新染色盘;

3.显色时变为黄色或棕色后立即弃去,更换新鲜显色液,一般来说染一块胶应配制 500ml 染液。更换 2-3 次;

4.市售甲醛的浓度为 37%;

5.三种方法均与质谱兼容,Blum 法敏感性高,但背景呈淡黄色,EMBL法次之但背景较低,染色点较黑。Vorum 相对不敏感,但背景清晰,信噪比高。

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