Abbexa丨艾美捷代理γ-氨基丁酸（GABA）ELISA试剂盒：高灵敏度和出色的特异性

一、产品概述

GABA 是一种重要的神经递质，在信号转导、心血管生物学、神经科学、骨骼代谢等多个研究领域具有关键作用。本试剂盒适用于一般生物样本的检测，可广泛应用于相关领域的研究工作。

γ - 氨基丁酸（GABA）ELISA 试剂盒是一种用于体外定量检测血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆、细胞裂解液及其他生物液体中 γ - 氨基丁酸浓度的试剂盒。该检测方法具有高灵敏度和出色的特异性，用于检测 γ - 氨基丁酸（GABA）。实验过程中未观察到 γ - 氨基丁酸（GABA）与其类似物之间存在显著的交叉反应或干扰。艾美捷作为Abbexa中国区代理商，为大家整理了一份γ-氨基丁酸（GABA）ELISA试剂盒中文说明书。

二、Abbexaγ-氨基丁酸（GABA）ELISA试剂盒（abx150348）组成：

本试剂盒基于竞争性酶联免疫吸附测定（ELISA）技术。其主要组成如下：

-预包被的96孔微孔板：预先包被有特异性抗体，用于捕获样本中的GABA。

-标准品：用于建立标准曲线，以定量分析样本中的GABA含量。

-标准品稀释缓冲液：用于稀释标准品溶液，以获得不同浓度的标准系列。

-洗涤缓冲液：用于在各步骤中清洗微孔板，去除未结合的成分，减少背景干扰。

-检测试剂A：生物素标记的试剂，参与竞争反应。

-检测试剂B：辣根过氧化物酶（HRP）标记的试剂，用于信号放大。

-稀释液A和稀释液B：分别用于稀释检测试剂A和检测试剂B，确保其在合适的工作浓度下发挥作用。

-TMB底物：用于显色反应，其颜色变化与GABA的含量呈反比关系。

-终止液：用于终止反应，使颜色变化固定，便于在特定波长下测量吸光度。

-封板膜：用于在反应过程中封闭微孔板，防止蒸发和交叉污染。

此外，进行实验还需要准备一些未提供的材料，如37℃恒温箱、多道和单道移液管及无菌移液头、洗瓶或自动微孔板清洗器、1.5ml离心管、蒸馏水、吸水滤纸、100ml和1升量筒、微孔板读数仪（波长：450nm）以及ELISA振荡器。

三、实验原理

本试剂盒采用竞争性ELISA技术。预先在96孔板上包被有特异性抗体。将标准品、测试样本和生物素偶联试剂加入到孔中并孵育，生物素标记的GABA与未标记的GABA之间会在预包被抗体上发生竞争性抑制反应。随后加入HRP偶联试剂，并再次孵育。在每个阶段使用洗涤缓冲液去除未结合的偶联物。使用TMB底物来定量HRP酶促反应。加入TMB底物后，只有含有足够GABA的孔才会产生蓝色产物，加入酸性终止液后会变为黄色。黄色的强度与结合在板上的GABA量成反比。在微孔板读数仪上以450nm波长光谱光度法测量OD值，从而可以计算出GABA的浓度。

四、试剂准备

1.标准品：按照说明书推荐的体积，用标准品稀释缓冲液配制标准品溶液。然后按照协议中的指示，使用标准品稀释缓冲液对标准品溶液进行连续稀释。

2.洗涤缓冲液：按照协议中的指示，用蒸馏水稀释浓缩的洗涤缓冲液。

3.检测试剂准备：计算所需的工作溶液体积。分别用稀释液A和稀释液B按1：100的比例稀释检测试剂A和检测试剂B。

五、实验步骤

1.设置标准、测试样本和对照孔：在预包被的微孔板上分别设置标准孔、测试样本孔和对照（零）孔，并记录它们的位置。建议每个标准和样本至少进行双份测量。

2.加样：向标准孔中加入50uL稀释后的标准品，向对照（零）孔中加入50uL标准品稀释缓冲液，向样本孔中加入50uL稀释后的样本。

3.加入检测试剂A：立即向每个孔中加入50uL检测试剂A工作溶液。用封板膜封住微孔板，在37℃下孵育1小时。

4.洗涤：移除封板膜，弃去溶液。用1X洗涤缓冲液洗涤微孔板3次。

5.加入检测试剂B：向每个孔中加入100uL检测试剂B工作溶液，封板后在37℃下孵育30分钟。

6.再次洗涤：弃去溶液，用洗涤缓冲液按前一步骤所述方法洗涤微孔板5次。

7.加入TMB底物：向每个孔中加入90uLTMB底物。用封板膜封住微孔板，在37℃下孵育10-20分钟。避免光照。孵育时间仅供参考，最佳时间应由最终用户确定。不要超过30分钟。

8.加入终止液：向每个孔中加入50uL终止液。立即在450nm波长下读取吸光度。

六、结果计算

本实验为竞争性实验，因此样本中GABA的浓度与其测量的吸光度呈反比关系。创建一个以标准浓度的对数（y轴）和平均吸光度（x轴）为坐标的图表。通过标准点绘制最佳拟合趋势线。可以从标准曲线上插值计算出样本中GABA的浓度。

七、实验精密度

1.批内精密度（同一批次内的精密度）：对低、中、高三个水平的GABA样本进行20次测试，均在同一块微孔板上进行。变异系数（CV%）=（标准差/平均值）×100。批内精密度：CV<10%。

2.批间精密度（不同批次之间的精密度）：对低、中、高三个水平的GABA样本在3块不同的微孔板上进行测试，每块微孔板上各有8个重复样本。批间精密度：CV<12%。

八、产品特性

-检测范围：4.94pg/ml-400pg/ml

-灵敏度：<2.17pg/ml

-标准品形式：冻干

-检测方法：比色法

-样本类型：血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆、细胞裂解液及其他生物液体

-目标类型：抗原

九、注意事项

1.仅用于研究目的：本产品仅供研究使用，不得用于诊断或治疗用途。

2.范围和灵敏度可能发生变化：范围和灵敏度可能会发生变化。

3.样本浓度要求：为获得准确结果，样本浓度必须稀释至试剂盒的中等范围内。

4.样本类型优化：请注意，Abbexa的试剂盒针对天然样本的检测进行了优化，而不是重组蛋白。Abbexa无法保证检测重组蛋白，因为它们可能具有与天然蛋白不同的序列或三级结构。

十、存储与有效期

-存储条件：试剂盒在运输过程中应保持在4℃。收到后，请按照试剂盒说明书中的存储说明进行存储。

-有效期：本试剂盒的有效期至少为6个月。如需更长时间的有效期（最长可达12个月），请提前联系Abbexa。

-稳定性：试剂盒的稳定性由活性损失率决定。在适当的存储条件下，有效期内的损失率小于5%。为减少性能波动，应严格控制操作流程和实验室条件。

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