Abbexa丨艾美捷代理鼠源D-Dimer ELISA试剂盒说明书

一、产品概述

D - Dimer 是一种由纤维蛋白的两个D片段通过交联形成的蛋白质，它是血液凝块在纤溶过程中被降解产生的一种纤维蛋白降解产物（FDP）。在医学领域，D - Dimer 对于诊断弥漫性血管内凝血（一种血液疾病）以及深静脉血栓等病症具有重要的临床意义。本试剂盒专为定量检测小鼠血浆中的纤维蛋白原 D - Dimer 蛋白而设计，适用于小鼠样本的检测。艾美捷作为Abbexa中国区代理商，为大家整理了一份鼠源D-Dimer ELISA试剂盒中文说明书。

二、Abbexa鼠源D-Dimer ELISA试剂盒（abx258705）组成：

本试剂盒基于竞争性酶联免疫吸附测定（ELISA）技术原理。其核心组成如下：

预包被的 96 孔微孔板：预先包被有特异性抗体，用于捕获样本中的 D - Dimer。

标准品：用于建立标准曲线，以定量分析样本中的 D - Dimer 含量。

标准品稀释缓冲液：用于稀释标准品溶液，以获得不同浓度的标准系列。

洗涤缓冲液：用于在各步骤中清洗微孔板，去除未结合的成分，减少背景干扰。

检测试剂 A：生物素标记的试剂，参与竞争反应。

检测试剂 B：辣根过氧化物酶（HRP）标记的试剂，用于信号放大。

稀释液 A 和稀释液 B：分别用于稀释检测试剂 A 和检测试剂 B，确保其在合适的工作浓度下发挥作用。

TMB 底物：用于显色反应，其颜色变化与 D - Dimer 的含量呈反比关系。

终止液：用于终止反应，使颜色变化固定，便于在特定波长下测量吸光度。

封板膜：用于在反应过程中封闭微孔板，防止蒸发和交叉污染。

此外，进行实验还需要准备一些未提供的材料，如 37℃恒温箱、多道和单道移液管及无菌移液头、洗瓶或自动微孔板清洗器、1.5ml 离心管、蒸馏水、吸水滤纸、100ml 和 1 升量筒、微孔板读数仪（波长：450nm）以及 ELISA 振荡器。

三、实验原理

本试剂盒采用竞争性 ELISA 技术。预先在 96 孔板上包被有特异性抗体。将标准品、测试样本和生物素偶联试剂加入到孔中并孵育，生物素标记的 D - Dimer 与未标记的 D - Dimer 之间会在预包被抗体上发生竞争性抑制反应。随后加入 HRP 偶联试剂，并再次孵育。在每个阶段使用洗涤缓冲液去除未结合的偶联物。使用 TMB 底物来定量 HRP 酶促反应。加入 TMB 底物后，只有含有足够 D - Dimer 的孔才会产生蓝色产物，加入酸性终止液后会变为黄色。黄色的强度与结合在板上的 D - Dimer 量成反比。在微孔板读数仪上以 450nm 波长光谱光度法测量 OD 值，从而可以计算出 D - Dimer 的浓度。

四、试剂准备

1.标准品：按照说明书推荐的体积，用标准品稀释缓冲液配制标准品溶液。然后按照协议中的指示，使用标准品稀释缓冲液对标准品溶液进行连续稀释。

2.洗涤缓冲液：按照协议中的指示，用蒸馏水稀释浓缩的洗涤缓冲液。

3.检测试剂准备：计算所需的工作溶液体积。分别用稀释液 A 和稀释液 B 按 1：100 的比例稀释检测试剂 A 和检测试剂 B。

五、实验步骤

1.设置标准、测试样本和对照孔：在预包被的微孔板上分别设置标准孔、测试样本孔和对照（零）孔，并记录它们的位置。建议每个标准和样本至少进行双份测量。

2.加样：向标准孔中加入 50uL 稀释后的标准品，向对照（零）孔中加入 50uL 标准品稀释缓冲液，向样本孔中加入 50uL 稀释后的样本。

3.加入检测试剂 A：立即向每个孔中加入 50uL 检测试剂 A 工作溶液。用封板膜封住微孔板，在 37℃下孵育 1 小时。

4.洗涤：移除封板膜，弃去溶液。用 1X 洗涤缓冲液洗涤微孔板 3 次。

5.加入检测试剂 B：向每个孔中加入 100uL 检测试剂 B 工作溶液，封板后在 37℃下孵育 30 分钟。

6.再次洗涤：弃去溶液，用洗涤缓冲液按前一步骤所述方法洗涤微孔板 5 次。

7.加入 TMB 底物：向每个孔中加入 90uL TMB 底物。用封板膜封住微孔板，在 37℃下孵育 10 - 20 分钟。避免光照。孵育时间仅供参考，最佳时间应由最终用户确定。不要超过 30 分钟。

8.加入终止液：向每个孔中加入 50uL 终止液。立即在 450nm 波长下读取吸光度。

六、结果计算

本实验为竞争性实验，因此样本中 D - Dimer 的浓度与其测量的吸光度呈反比关系。创建一个以标准浓度的对数（y 轴）和平均吸光度（x 轴）为坐标的图表。通过标准点绘制最佳拟合趋势线。可以从标准曲线上插值计算出样本中 D - Dimer 的浓度。

七、实验精密度

1.批内精密度（同一批次内的精密度）：对低、中、高三个水平的 D - Dimer 样本进行 20 次测试，均在同一块微孔板上进行。变异系数（CV%）=（标准差/平均值）× 100。批内精密度：CV < 10%。

2.批间精密度（不同批次之间的精密度）：对低、中、高三个水平的 D - Dimer 样本在 3 块不同的微孔板上进行测试，每块微孔板上各有 8 个重复样本。批间精密度：CV < 12%。

八、注意事项

1.仅用于研究目的：本产品仅供研究使用，不得用于诊断或治疗用途。

2.范围和灵敏度可能发生变化：范围和灵敏度可能会发生变化。

3.样本浓度要求：为获得准确结果，样本浓度必须稀释至试剂盒的中等范围内。

4.样本类型优化：请注意，Abbexa的试剂盒针对天然样本的检测进行了优化，而不是重组蛋白。Abbexa无法保证检测重组蛋白，因为它们可能具有与天然蛋白不同的序列或三级结构。

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