Worthington丨艾美捷代理木瓜蛋白酶解离系统无EBSS，神经科学的精妙钥匙

在探索大脑与脊髓奥秘的漫长征程中，神经科学家们始终面临着一个基础而关键的挑战：如何从复杂的神经组织中，高效、温和且完整地分离出具有活性的单个神经细胞。这些分离出的细胞是进行体外电生理研究、药物筛选、细胞培养以及发育生物学探索的基石。

Worthington木瓜蛋白酶解离系统无EBSS（货号：WBC-LK003163）的出现，正是为了回应这一挑战，它将一个原本繁琐复杂、技术要求高的实验流程，转化为一套标准化、便捷且可靠的试剂盒，犹如为研究者们提供了一把开启神经细胞世界的精妙钥匙。

一、系统渊源与设计理念

该系统并非凭空创造，其核心方法源自Huettner和Baughman于1986年在《神经科学杂志》上发表的经典神经细胞分离术。这篇论文为酶学结合机械吹打分离神经细胞奠定了基础。Worthington公司在此基础上，着眼于“便利”与“简易”，将方法转化为一个即用型的试剂系统。这一设计理念使其不仅惠及经验丰富、频繁进行此类操作的资深研究者，也大大降低了偶尔需要进行神经细胞分离实验室的门槛。无论是专注于电生理记录的实验室，还是偶尔涉及原代神经细胞培养的项目，都能借助该套系统，以标准化的方式获得理想的结果，确保了实验的重复性与可靠性。

二、核心组件与协同作用

该系统的卓越性能，源于其内部各组分精准的配伍与协同工作。整套试剂盒提供的材料足以处理五份体积在0.3-0.4立方厘米的组织块。对于更大样本，只需按比例扩大各试剂用量即可。

1. Vial 1: 平衡盐溶液——反应的基石

首瓶是无菌的Earle's平衡盐溶液，含有钙、镁、碳酸氢盐和酚红指示剂。这100ml的溶液扮演着多重角色：它既是其他冻干粉试剂的复溶液，也是配制稀释抑制剂的基础。更重要的是，它提供了一个接近生理环境的缓冲体系，钙、镁离子对于维持细胞膜稳定性至关重要。使用前需用无菌的O?:CO?混合气体平衡，以确保pH稳定，酚红的颜色变化则为平衡程度提供了直观的视觉参考。冷藏保存与使用前平衡是其维持效力的关键。

2. Vial 2: 木瓜蛋白酶——解离的核心

五瓶独立的100单位木瓜蛋白酶冻干粉是解离过程的核心动力。每瓶预先添加了L-半胱氨酸和EDTA。L-半胱氨酸作为酶的激活剂，能显著增强木瓜蛋白酶的活性。EDTA则通过螯合金属离子，抑制一些金属依赖的蛋白酶，并有助于破坏细胞间的连接。使用时，用5ml EBSS复溶，得到每毫升含20单位木瓜蛋白酶的溶液，其中L-半胱氨酸浓度为1mM，EDTA为0.5mM。短暂的37°C孵育确保了酶完全溶解并恢复至最佳活性状态。木瓜蛋白酶作为一种非特异性蛋白酶，能有效水解细胞外基质和细胞间连接蛋白，但又比胰蛋白酶等更为温和，对细胞表面受体损伤较小，特别适合对酶敏感的神经细胞。

3. Vial 3: 脱氧核糖核酸酶I——清除“粘合剂”

五瓶2000单位的DNase I冻干粉是解离成功的重要保障。在组织解离过程中，难免有细胞破裂，释放出高分子量的DNA。这些DNA会使溶液变得极其粘稠，像“胶水”一样缠绕住已被分离的细胞，形成团块，严重影响细胞得率和活性。DNase I能够迅速降解这些DNA，显著降低溶液粘度，使细胞得以轻松分散。复溶时，仅需加入0.5ml EBSS，即可获得高浓度的DNase I溶液，操作中需避免剧烈混合以防酶失活。

4. Vial 4: 卵粘蛋白蛋白酶抑制剂——及时“刹车”

一大瓶卵粘蛋白蛋白酶抑制剂与牛血清白蛋白的冻干混合物，是保护细胞的关键。当木瓜蛋白酶完成其解离任务后，必须及时终止其作用，否则持续的蛋白酶活性将损伤细胞膜，导致细胞活力下降甚至死亡。用32ml EBSS复溶此瓶后，得到含有10mg/ml卵粘蛋白抑制剂和10mg/ml牛血清白蛋白的溶液。卵粘蛋白能高效且特异性地抑制木瓜蛋白酶的活性，如同一个精准的“刹车”。牛血清白蛋白则能提供保护，稳定细胞膜。此溶液复溶后稳定，可分次使用，每次使用前同样需要冷藏和气体平衡。

三、操作流程与优势体现

典型操作流程大致如下：取得新鲜的大鼠脊髓或其他神经组织，切成小块，置于含活化木瓜蛋白酶溶液的试管中，在37°C下温和孵育进行酶消化。期间可轻微摇荡。消化完成后，移去酶液，用预平衡的EBSS轻柔清洗组织。随后加入含DNase的卵粘蛋白抑制剂溶液，通过轻柔的吹打完成机械分散。此时，DNase防止DNA导致的粘稠，而卵粘蛋白则彻底中和残留的木瓜蛋白酶活性。最后，通过梯度离心纯化得到悬浮的单个神经细胞。

这一标准化流程的优势显而易见：

简便性：预分装、冻干的试剂省去了研究者自行配制、滴定、过滤除菌的繁琐步骤。

一致性：每批产品均经过大鼠脊髓神经细胞分离的性能测试，保证了批次间的高度一致性，使不同时间、不同实验室的实验结果具有可比性。

温和性与高活力：木瓜蛋白酶与卵粘蛋白抑制剂组合的温和特性，加上DNase对粘DNA的清除，共同保障了分离细胞的高活率和良好形态。

灵活性：五份独立包装的设计允许研究者根据实验需要灵活安排，避免浪费。

四、应用与展望

Worthington木瓜蛋白酶 dissociation 系统已成为神经科学研究中获取原代神经细胞的经典工具。它不仅服务于基础的细胞电生理、药理学研究，也在神经退行性疾病模型构建、神经毒性测试、突触可塑性研究等领域发挥重要作用。

从Worthington公司提供的相关产品线——如胶原酶、透明质酸酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶及其抑制剂，以及针对肝细胞、心肌细胞等的专门分离系统——可以看出，针对不同组织类型和细胞种类的特异性解离方案正在不断发展和优化。这反映了生命科学领域对高质量原代细胞需求的日益增长。

总而言之，Worthington木瓜蛋白酶 dissociation 系统通过其精心的组分设计、标准化的生产流程和用户友好的包装，成功地将一个关键的神经科学技术进行了“封装”和普及。它不仅是实验室中一个可靠的试剂盒，更是推动神经科学微观探索不断向前的一把利器，持续助力科研人员揭开大脑与神经系统一个又一个的谜题。

文献参考：

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