荧光法脂质定量试剂盒，高通量脂质代谢筛查荧光分析工具

一、产品概述与技术原理

由艾美捷代理Cell Biolabs推出的荧光法脂质定量试剂盒（货号STA-617，100次检测规格）是一款基于脂质结合荧光探针的高灵敏度总中性脂质定量工具。脂质不仅是细胞膜结构完整性的核心保障，更深度参与膜 trafficking、信号转导、凋亡调控及能量储存等关键生理过程，其代谢紊乱与癌症、糖尿病、阿尔茨海默病及冠心病密切相关。为支撑上述疾病的机制研究与药物干预效果评价，研究者需先从组织或细胞中提取脂质，再行定量检测。

传统检测方法虽有高灵敏度方案，但往往依赖HPLC、光散射检测器或薄层色谱-FID等昂贵设备。本试剂盒采用一种脂质结合分子，该探针在游离状态下荧光微弱，一旦与中性脂质结合后荧光信号显著增强，通过荧光酶标仪（激发490 nm/发射585 nm）简单读取即可完成定量。检测灵敏度达3.9 mg/dL，较传统香草醛法灵敏至少10倍。每套试剂可支持100次检测（含标准品及未知样本）。

二、适用场景与核心优势

本试剂盒适用于以下典型研究场景：

提取后脂质定量：配合脂质提取试剂盒（如STA-612无氯仿提取试剂盒），完成从样本前处理到定量分析的全流程闭环

脂质代谢表型筛查：糖尿病、高脂血症、脂肪肝等模型中总中性脂质含量的快速评估

细胞脂质累积检测：油红O染色替代方案的定量版，尤其适合药物诱导的脂肪变性或成脂分化模型

食品与营养学研究：膳食脂质含量测定及消化吸收评价

核心优势：

超高灵敏度：检测下限3.9 mg/dL，比香草醛比色法灵敏10倍以上，显著减少样本消耗

免萃取直接测定：对于纯化脂质样本，可直接溶解于有机溶剂后检测，无需复杂衍生化处理

操作简便：“干燥—加探针—读板”三步即可完成，单次检测可在1小时内完成

高通量兼容：96孔黑底荧光板格式，适配常规荧光酶标仪，支持批量样本同步分析

三、操作流程与关键参数

核心步骤：

将脂质提取物（干燥膜）溶解于有机溶剂（如甲醇、氯仿或异丙醇，需自备）中，取适量转移至96孔荧光板

在通风橱或加热模块中挥发去除有机溶剂，形成脂质薄膜

加入稀释后的荧光探针工作液，37°C或55°C孵育适当时间使结合充分

以490 nm激发、585 nm发射读取荧光强度，同时以梯度稀释的脂质标准品制备标准曲线，未知样本从曲线中回算浓度

关键质控点：

有机溶剂需完全挥发，残留溶剂会淬灭荧光信号或干扰脂质-探针结合

孵育温度需严格控制（55°C加热块或烘箱），确保结合动力学一致

建议设置溶剂空白对照（无脂质仅有有机溶剂）以扣除背景荧光

脂质标准品为20 g/dL中性脂质混合物，使用前需充分混匀并按需稀释

荧光板建议使用黑色不透明板，减少孔间光散射干扰

四、试剂盒组分与储存要求

提供组分（4°C运输与保存）：

荧光探针（100×）200 uL：脂质结合荧光分子，使用前用适当溶剂稀释至工作浓度

脂质标准品100 uL：20 g/dL中性脂质混合物，用于制备标准曲线

需自备材料：

有机溶剂（甲醇、氯仿、异丙醇，推荐色谱级或分析纯）

玻璃管、离心管或96孔荧光板（黑色或不透明）

55°C加热块或烘箱

荧光酶标仪（具备490 nm激发/585 nm发射滤光片）

储存要点：全试剂盒于4°C保存。荧光探针为光敏组分，建议避光保存，使用前平衡至室温。脂质标准品为高浓度有机溶液，使用后及时盖紧瓶盖防止溶剂挥发导致浓度改变。

五、配套产品推荐

建议搭配以下试剂盒构建完整的脂质研究解决方案：

STA-612：无氯仿脂质提取试剂盒（绿色安全的上清相提取方案）

STA-613：脂质定量试剂盒（比色法，适合无荧光酶标仪的实验室）

STA-390：总胆固醇检测试剂盒（荧光法）

STA-391：HDL和LDL/VLDL胆固醇检测试剂盒（区分脂蛋白亚类）

STA-397：血清甘油三酯定量试剂盒（荧光法）

实验结果解读需注意本试剂盒特异性针对中性脂质（甘油三酯、胆固醇酯等），不适用于磷脂或游离脂肪酸的单独定量。若需分馏检测，建议结合TLC或HPLC预分离后再使用本试剂盒进行各组分定量。对于含色素或自发荧光干扰的样本（如肝脏组织提取物），建议设置样本内参对照（加标回收实验）以校正基质效应。

文献参考

1. Folch J, Lees M, and Slone Stanley GH (1956) J. Biol. Chem. 226, 497-509.

2. Lutzke BS and Brauler JM. (1990) J. Lipid Res., 31, 212-2130

3. Fraser AJ, Tocher DR, and Sargent JR (1985) J. Exp. Marine Biol. And Ecol. 88, 91-99.

4. Chabrol E and Charonnat R (1937) Presse Med. 45, 1713-1714.