无氯仿脂质提取试剂盒，高通量兼容型脂质组学前处理方案

一、产品概述与技术革新

由艾美捷代理Cell Biolabs推出的无氯仿脂质提取试剂盒（货号STA-612，50次制备规格）是一款基于有机溶剂萃取原理、完全摒弃氯仿使用的脂质分离工具。脂质作为细胞膜结构组分和信号传导、能量储存的关键参与者，其代谢异常与癌症、糖尿病、阿尔茨海默病及冠心病等多种疾病密切相关。在脂质组学、代谢疾病机制及药物安全性评价等研究中，从组织或细胞中高效提取高纯度总脂质是开展下游分析的前置环节。然而，传统的Folch法虽长期被视为脂质提取的金标准，却存在两大核心痛点：其一，目标脂质分布于下层有机相，穿破上层蛋白层时易造成交叉污染，导致下游HPLC等分析仪器堵塞；其二，氯仿被美国EPA列为B2类可能人类致癌物，长期吸入暴露可致肝炎、黄疸甚至肝肾肿瘤发生，实验室合规成本与操作安全隐患不容忽视。

本试剂盒通过创新的溶剂体系，将脂质萃取至上清有机相，既简化了操作流程、避免了蛋白层穿透污染，又实现了完全无氯仿化的绿色提取。每套试剂可支持50次提取（以100 uL样本体积为标准），大体积样本可按比例调整，仍可保证清晰的相分离与稳定的提取效率。

二、适用场景与核心优势

本试剂盒适用于以下典型研究场景：

细胞与组织脂质组学前处理：培养细胞沉淀、血清/血浆、组织匀浆中总脂质的批量提取，为后续LC-MS或GC-MS分析提供洁净样本

脂质代谢疾病机制研究：糖尿病、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪肝、肥胖等模型中脂质谱差异的筛查与验证

营养学与食品科学：饮食干预后生物样本脂质组成变化的检测前处理

药物安全性评价：候选化合物对脂质代谢通路干扰效应的早期筛查

核心优势：

无氯仿安全保障：彻底杜绝氯仿健康风险及废液处理合规成本，无需特殊通风柜限制，符合绿色实验室标准

上清相简便回收：无需穿刺蛋白层，回收操作更简便，提取物纯度显著提升，下游HPLC/MS兼容性更佳

高通量适应性：操作流程支持96孔板或批量离心管并行处理，适配自动化液体工作站

灵活样本量：支持10 uL微量血清至500 uL以上大体积样本，按比例调整试剂用量即可

三、操作流程与关键参数

核心步骤：

将液体样本（如血清、血浆）或细胞沉淀（重悬于PBS）转移至玻璃离心管中

加入脂质提取试剂A（专利醇类），漩涡混匀使样本充分分散，形成均一悬液

依次加入脂质提取试剂B1和B2（专利有机化合物组合），盖紧管盖后剧烈漩涡混匀1-2分钟，静置至两相清晰分层

以2000 rpm离心5-10分钟加速相分离，小心回收上层有机相（含目标脂质）至新玻璃管，注意勿扰动中间界面

将回收液在温和氮气流或真空下干燥（建议温度≤40°C），所得脂质膜用适当有机溶剂（自备，推荐丁醇或环己烷）复溶，供下游定量或谱学分析

关键质控点：

所有操作应在玻璃器皿中进行，避免塑料离心管对脂质的非特异性吸附造成回收率损失

样本若为组织需预先匀浆处理，确保充分裂解以释放全部脂质

相分离不完全时可适当增加离心时间或重新混匀后再次离心

回收上层相时建议使用移液枪缓慢吸取，宁可损失部分上清也不可触及界面

干燥过程不宜过度加热，防止不饱和脂肪酸氧化降解产生过氧化物干扰下游结果

四、试剂盒组分与自备材料

提供组分（室温运输与保存）：

脂质提取试剂A 25 mL（琥珀色玻璃瓶，专利醇类组分，避光保存）

脂质提取试剂B1 30 mL×2瓶（专利有机化合物）

脂质提取试剂B2 20 mL（专利有机化合物）

脂质提取试剂C 25 mL

需自备材料：

玻璃离心管（15 mL或50 mL）或耐有机溶剂微量离心管

PBS缓冲液（无Ca²⁺/Mg²⁺）

漩涡混匀器

复溶用有机溶剂（如氯仿、丁醇或环己烷，按下游分析方法选择；若后续进行酶学定量则建议使用异丙醇）

储存要点：试剂盒全组分于室温储存，瓶子应直立放置防止渗漏。试剂A及B1/B2均为琥珀色玻璃瓶避光包装，避免长期暴露于强光。使用后及时盖紧瓶盖，防止溶剂挥发导致组分浓度改变。

五、下游脂质定量配套产品推荐

提取后的总脂质可结合以下定量试剂盒进行特定组分分析，构建从提取到定量的完整工作流：

STA-613：脂质定量试剂盒（比色法，总脂质含量测定，适用于提取效率评估）

STA-384：总胆固醇检测试剂盒（比色法，测定总胆固醇含量）

STA-391：HDL和LDL/VLDL胆固醇检测试剂盒（区分脂蛋白亚类的胆固醇分布）

STA-396：血清甘油三酯定量试剂盒（比色法，适用于代谢综合征研究）

STA-618：游离脂肪酸检测试剂盒（比色法，检测非酯化脂肪酸水平）

提取效率验证建议采用内标法（如添加已知量鞘磷脂或磷脂酰胆碱作为回收率指示），同时设置无样本空白提取对照以扣除非特异性干扰信号。对于极微量样本（如10-20 uL血清），可适当减少各试剂用量并按比例调整，以确保相分离清晰且回收操作可行。建议首次使用前以标准脂质混合物进行预实验，优化提取与复溶条件，确保数据可靠性与批次间一致性。

文献参考

1. Folch J, Lees M, and Slone Stanley GH (1956) J. Biol. Chem. 226, 497-509.

2. Iverson SJ, Lang SLC, and Cooper MH (2001) J. Lipid Res. 36, 1283-1287.

3. Bang DY, Byeon SK, Moon MH (2014) J. Chromatogr A. 28, 1331

4. Reis A, Rudnitskaya A, Blackburn GJ, Mohd Fauzi N, Pitt AR, Spickett CM (2013) J. Lipid Res.,54, 1812-1824.