ViraBind腺病毒微量制备试剂盒--免超离离心柱式腺病毒快速纯化系统

一、产品概述与技术革新

由艾美捷代理Cell Biolabs推出的ViraBind腺病毒微量制备试剂盒（货号VPK-099，10次制备规格）是一款基于离心柱法的快速腺病毒纯化工具，专为从细胞培养上清中高效捕获和纯化重组腺病毒颗粒设计。重组腺病毒凭借宿主范围广（可感染多种哺乳动物细胞，包括增殖与非增殖细胞）、不整合宿主基因组（避免原癌基因激活或抑癌基因失活）、可高效表达重组蛋白及递送RNAi等优势，已成为基因治疗、疫苗研发和基础研究中广泛应用的病毒载体系统。然而，传统腺病毒纯化依赖CsCl超速离心结合透析脱盐，操作耗时长达16-24小时，且需要昂贵的超速离心机设备，限制了实验室通量和可及性。

本试剂盒利用腺病毒衣壳蛋白的独特表面特性，通过离心柱特异性捕获病毒颗粒，完全规避了超速离心步骤，将整个纯化流程缩短至约30分钟。每根离心柱设计用于纯化来自一个T75培养瓶或10 cm培养皿的病毒收获液，柱容量高达1.0×10¹¹病毒颗粒（VPs），病毒回收率超过95%。每套试剂可支持10次制备。

二、适用场景与核心优势

本试剂盒适用于以下典型研究场景：

1.重组腺病毒快速小量制备：适用于从HEK 293细胞中扩增病毒后，快速获取高纯度病毒原液用于感染预实验或功能验证

2.多个病毒株并行纯化：离心柱形式支持同时处理多个样本，适合突变体筛选或表达优化

3.下游应用的前处理：纯化后的病毒可直接用于细胞感染、动物注射或滴度测定（可配套QuickTiter腺病毒滴度免疫检测试剂盒，VPK-109）

核心优势：

省时高效：总操作时间约30分钟，相比CsCl法的16-24小时，效率提升超过30倍

高回收率：>95%的病毒回收率，最大限度减少珍贵样本损失

操作简便：无需超速离心机，常规台式离心机即可完成，降低设备门槛

高纯度产出：离心柱特异性捕获去除细胞蛋白和培养基组分，避免CsCl残留对下游细胞实验的干扰

三、操作流程与关键参数

核心步骤：

从感染重组腺病毒的HEK 293细胞培养物中收获病毒上清（建议先低速离心去除细胞碎片）

将上清与上样缓冲液混合后转移至ViraBind离心柱，利用衣壳蛋白特性使病毒结合于柱基质

以洗涤缓冲液漂洗离心柱，去除未结合的细胞蛋白、DNA及培养基杂质

用洗脱缓冲液（含高盐Tris-Mg²⁺体系）将高浓度病毒从柱上洗脱收集

纯化病毒可直接使用或补充甘油后于-80°C长期保存

关键质控点：

上样前细胞碎片需充分去除（建议3000 rpm离心5分钟或0.45 ?m过滤），防止堵塞柱床影响结合效率

离心步骤需严格按说明书推荐速度和时间操作，过速或过久可能损伤病毒结构

洗脱步骤建议采用多次小体积洗脱（如2×150 uL）以最大化回收率

若后续进行动物注射实验，建议洗脱后透析或稀释以降低高盐缓冲液对动物的潜在影响

四、试剂盒组分与自备材料

提供组分（室温运输与保存）：

ViraBind离心柱及收集管：10根迷你离心柱 + 20支收集管

上样缓冲液10 mL

洗涤缓冲液20 mL

洗脱缓冲液10 mL（25 mM Tris pH 7.5，2.5 mM MgCl?，1 M NaCl）

需自备材料：

重组腺病毒感染的HEK 293细胞及培养物

细胞培养离心机（低速，用于去除细胞碎片）

微量离心机（≥8,000 rpm，用于柱离心操作）

甘油（用于病毒长期保存，建议终浓度10-15%）

储存要点：全试剂盒组分于室温（15-30°C）密封保存，避免高温或阳光直射。使用前各组分无需特殊预处理，直接平衡至室温即可。使用后未用完的缓冲液应盖紧瓶盖，防止污染或蒸发。

五、配套产品推荐

建议搭配以下产品构建完整的腺病毒工作流程：

AD-100：293AD细胞系（高贴壁性能，适合腺病毒扩增）

AD-200：ViraDuctin腺病毒转导试剂（提高转导效率，尤其针对难感染细胞）

VPK-109：QuickTiter腺病毒滴度免疫检测试剂盒（纯化后快速测定功能性滴度）

VPK-111：快速RCA检测试剂盒（检测复制型腺病毒污染，确保产品质量安全）

VPK-252：RAPAd CMV腺病毒表达系统（从构建到扩增的全流程方案）

纯化后的病毒建议分装保存于-80°C（含10%甘油），避免反复冻融导致滴度下降。首次使用本试剂盒时建议以感染复数（MOI）验证回收病毒的功能活性，确保纯化工艺未影响病毒感染能力。对于需更高病毒量的应用（如动物体内实验），可采用多次制备合并或配合超滤浓缩步骤。

文献参考

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