缺氧探针--PAb27，良好的免疫染色，且成本较低

Hypoxyprobe PAb27 Kit 组件详解：

Hypoxyprobe-1是一种取代的2-硝基咪唑，其化学名称和唯一成分为吡唑噻唑盐酸盐。Hypoxyprobe?-1的分子量为290.8，水溶性为400毫摩尔，约合116 mg/ml；在0.9%盐水中的紫外吸收峰为324 nm，消光系数为7020。自由碱形式的吡唑噻唑分子量为254.3，pKa值为8.7，辛醇-水分配系数为8.5。

Hypoxyprobe-1在固态和水溶液中都具有化学稳定性。例如，固态Hypoxyprobe-1在室温下避光存放两年未检测到降解（通过UV和HPLC分析）。在0.9%盐水中的Hypoxyprobe-1溶液以100 g/l的浓度在4°C下存放4.5年，亦未检测到降解（UV和HPLC分析）。吡唑噻唑在缺氧细胞中被还原激活，激活的中间体与蛋白质、肽和氨基酸中的巯基形成稳定的共价加合物。抗体试剂PAb27HAP与这些加合物结合，从而实现免疫化学检测。

PAb27 HAP是一种高滴度亲和纯化的兔抗体制剂，能与缺氧细胞中Hypoxyprobe-1的蛋白加合物结合。PAb27HAP中含有叠氮化钠，以增强稳定性。通过对冷冻固定或福尔马林固定的石蜡嵌入切片进行免疫组化，可以研究感兴趣的组织；也可以使用Western印迹或流式细胞术，经过组织解离后进行分析。注意：PAb27HAP与缺氧细胞中吡唑噻唑的蛋白、肽和氨基酸加合物结合，但免疫组化检测的组织处理会洗掉小分子肽和氨基酸加合物，因此免疫组化缺氧检测依赖于缺氧组织中吡唑噻唑的蛋白加合物。

艾美捷PAb27：

货号：HPB-PAb27

应用：用于细胞和组织缺氧的免疫化学检测，包括免疫荧光、免疫过氧化物酶法、西方 blotting 或流式细胞术。当将 Hypoxyprobe PAb27 套件与抗兔次级试剂（PAb27 套件中不提供次级试剂）结合使用时，小鼠组织中的背景非常低。

数量：

a. Hypoxyprobe-1 PAb27 套件包含 100 mg、200 mg 或 1000 mg 的 Hypoxyprobe-1（吡唑噻唑盐酸盐）。小动物研究的典型剂量为 60 mg/kg 体重，而人类研究的典型剂量为 14 mg/kg 体重。

b. 100 mg 和 200 mg 套件各含一瓶（100 和 200 mg 套件）或两瓶（1000 mg 套件）200 微升的高滴度亲和纯化抗吡唑噻唑兔抗血清，含有 0.09% 的叠氮钠和 1% 的 BSA 作为稳定剂。PAb27HAP 的最佳稀释度需由每位研究者自行确定。

不提供：次级抗兔试剂和标准 IHC 试剂，如缓冲液、底物和色原等。

存储：

a. 将 Hypoxyprobe-1 固体在室温下避光保存（也可在 28 摄氏度下保存）。

b. 将兔 PAb27HAP 存储在 2-8 摄氏度。切勿冷冻。

Hypoxyprobe PAb27 Kit检测说明：

对正常或肿瘤组织缺氧的研究始于静脉输注、腹腔注射或口服摄入Hypoxyprobe-1溶液。典型剂量为小动物研究60 mg/kg体重，人类研究为14 mg/kg体重。对于一只25克的小鼠，这相当于1.5 mg/只。在小鼠中，使用高达400 mg/kg的剂量没有检测到毒性或组织缺氧变化，但60 mg/kg的剂量可提供良好的免疫染色，且成本较低。Hypoxyprobe-1在盐水中的溶解度为116 mg/ml，因此可以使用非常小的体积来施用Hypoxyprobe-1。

在注射或摄入后，Hypoxyprobe-1会分布到所有组织，包括大脑，但仅在氧浓度低于14微摩尔的细胞中与含巯基的蛋白质形成加合物——这相当于37°C下的部分压力pO2 = 10 mmHg。除了肿瘤外，正常组织如肝脏、肾脏和皮肤中也存在氧浓度在10 mmHg及以下的细胞，这些正常组织会结合Hypoxyprobe-1。

Hypoxyprobe-1在小鼠中的血浆半衰期约为25分钟。相比之下，大鼠的血浆半衰期为45分钟，犬为90分钟，人类为300分钟。感兴趣的小鼠组织可在施用Hypoxyprobe-1后15至90分钟内采集。在采集时，组织中残留的Hypoxyprobe?-1在组织缺氧时会结合。然而，残留的Hypoxyprobe?-1量与组织在15至90分钟实验中暴露的量相比非常小，因此任何由于残留Hypoxyprobe?-1导致的非特异性结合是不可检测的。

除了动物研究，Hypoxyprobe 试剂盒还可用于细胞培养。通常，细胞悬液在含有100至200微摩尔Hypoxyprobe-1的缺氧环境中孵育1至2小时。细胞通过离心收集，固定并使用PAb27HAP及色原或荧光二级试剂进行免疫染色。