缺氧探针--RedPE：揭示细胞缺氧机制的创新工具

Hypoxyprobe-1 RED PE试剂盒组件详细描述：

1) Hypoxyprobe-1是一种取代的2-硝基咪唑，其化学名称为盐酸皮莫尼达唑，分子量为290.8；水溶性为400毫摩尔（116 mg/ml）；在324 nm波长下具有紫外线吸收（在0.9%生理盐水中消光系数为7020）。游离碱基皮莫尼达唑的分子量为254.3，pKa为8.7，八醇-水分配系数为8.5。固体Hypoxyprobe-1在室温下低光照条件下储存了两年，并在4℃的0.9%生理盐水（100 g/liter）中储存了4.5年，未检测到降解（UV和HPLC分析）。皮莫尼达唑在缺氧细胞中被还原激活，并与蛋白质、肽和氨基酸中的巯基（硫氢基）形成稳定的加合物。RED PE染料-MAb1与这些加合物结合，从而允许通过免疫化学方法进行检测。

2) RED PE染料-MAb1是一种与大鼠IgG1单克隆抗体（MAb克隆4.3.11.3）偶联的染料，浓度为0.5 mg/ml，含有1% BSA和0.09%叠氮钠作为稳定剂。感兴趣的组织可以通过在冷冻固定切片或甲醛固定石蜡包埋切片上的免疫组化进行研究，或者通过组织解离后的流式细胞术进行研究。  

注意：RED PE染料-MAb1结合皮莫尼达唑的蛋白质、肽和氨基酸加合物，但在免疫组化过程中，组织处理会洗去肽和氨基酸加合物，因此免疫组化缺氧检测依赖于缺氧组织中皮莫尼达唑的蛋白质加合物。

艾美捷RedPE：

货号：HPB-RedPE

应用：用于细胞和组织缺氧的免疫化学检测，包括免疫荧光、免疫过氧化酶或流式细胞术。该Hypoxyprobe-1 RED PE试剂盒在福尔马林固定的石蜡包埋大鼠肿瘤组织中提供强烈的免疫染色效果，背景极低。

数量：

a. Hypoxyprobe-1 RED PE试剂盒包含100 mg、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe-1（匹莫噻唑盐酸盐）。通常，动物研究中使用的剂量为60 mg/kg体重。

b. 一个小瓶（100 mg和200 mg试剂盒）或两个小瓶（1000 mg试剂盒）含有200 ?L稀释的RED PE染料偶联的IgG1大鼠单克隆抗匹莫噻唑抗体（克隆11.23.22.R）。每个小瓶包含200微升的0.50 mg/ml RED PE染料-MAb1溶液，PBS中含有1% BSA和0.09%叠氮化钠。RED PE染料-MAb1的最佳稀释度由研究人员确定，但发现1:50-100的稀释度在大鼠肿瘤组织中提供强烈的免疫荧光染色。RED PE染料-MAb1专为免疫荧光设计，可在荧光显微镜下或流式细胞术和Western Blot应用中可视化。免疫荧光中抗体的稀释度通常低于免疫过氧化酶检测系统中使用的稀释度。

不提供：用于免疫组织化学分析的标准试剂。

储存：

a. 将Hypoxyprobe-1固体在黑暗中室温储存（也可在2-8°C的黑暗中储存）。

b. 将RED PE染料-MAb在2-8°C的黑暗中储存。请勿冷冻。

Hypoxyprobe-1 RED PE试剂盒检测说明：

1. 正常或肿瘤组织缺氧的研究开始于以60 mg/kg体重剂量静脉输注、腹腔注射或口服给药Hypoxyprobe-1（盐酸皮莫尼达唑）溶液。对于25克的小鼠，相当于1.5 mg/只。对小鼠使用高达400 mg/kg的剂量未检测到毒性或组织缺氧变化，但60 mg/kg可以在最低成本下获得良好的免疫染色。Hypoxyprobe-1在生理盐水中的溶解度为116 mg/ml，因此可以使用非常小的体积来给药。注射或口服后，Hypoxyprobe-1会分布到所有组织，包括大脑，但只有在氧气浓度低于14微摩尔（相当于37℃下pO2 = 10 mmHg）的细胞中与含巯基的蛋白质形成加合物。除了肿瘤，肝脏、肾脏和皮肤等正常组织中也存在pO2 = 10 mmHg及以下的细胞，这些正常组织也会结合Hypoxyprobe-1。Hypoxyprobe-1在小鼠体内的血浆半衰期约为25分钟。相比之下，老鼠的血浆半衰期为45分钟，狗为90分钟，人类为300分钟。对感兴趣的大鼠组织可在Hypoxyprobe-1给药后15至90分钟内收集。在收获时，组织中残留的Hypoxyprobe-1将在组织缺氧时结合，但与组织在15至90分钟实验期间暴露的Hypoxyprobe-1的数量相比，残留量非常小，因此任何由于残留Hypoxyprobe-1导致的非特异性结合是不可检测的。

除了动物研究，Hypoxyprobe 试剂盒还可以用于细胞培养。通常，细胞悬液在100至200微摩尔的Hypoxyprobe-1存在下，在缺氧条件下孵育1至2小时。细胞通过细胞旋转收集，固定并用RED PE MAb-1免疫染色。