缺氧探针--CY 7，高效免疫染色方案

Hypoxyprobe?-1 CY 7 Kit 组件详细描述：

Hypoxyprobe?-1是一种取代的2-硝基咪唑，其化学名称为吡唑噻唑盐酸盐，分子量为290.8；水溶性为400毫摩尔（116 mg/ml）；在324 nm处的紫外吸收度（在0.9%盐水中的消光系数为7020）。其游离碱形式的吡唑噻唑分子量为254.3，pKa为8.7，辛醇-水分配系数为8.5。有关Hypoxyprobe?-1的作用机制、常见问题（FAQ）和应用，请访问www.hypoxyprobe.com。固体Hypoxyprobe?-1在温室阴暗环境中存储了两年，并在0.9%盐水（100 g/升）中在4°C下保存了4.5年，没有检测到降解（紫外线和高效液相色谱分析）。吡唑噻唑在缺氧细胞中经过还原激活，与蛋白质、肽和氨基酸中的巯基（硫氢基）形成稳定的加合物。CY 7染料-MAb1能够与这些加合物结合，从而通过免疫化学方法进行检测。

CY 7染料-MAb1是一种染料结合的鼠IgG1单克隆抗体（MAb克隆4.3.11.3），以0.5 mg/ml的浓度在含有1% BSA和0.09%叠氮钠的PBS中提供。感兴趣的组织可以通过免疫组织化学在冷冻固定切片或福尔马林固定石蜡嵌入切片上进行研究，或者在组织解离后通过流式细胞术进行分析。注意：CY 7染料-MAb1与吡唑噻唑的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但免疫组织化学过程中的组织处理会冲洗掉肽和氨基酸加合物，因此免疫组织化学缺氧检测依赖于缺氧组织中吡唑噻唑的蛋白质加合物。

艾美捷CY 7：

货号：HPB-CY 7

应用：用于细胞和组织缺氧的免疫化学检测，包括免疫荧光、免疫过氧化物酶法或流式细胞术。该Hypoxyprobe?-1 CY 7试剂盒在福尔马林固定、石蜡嵌入的鼠肿瘤组织中提供强烈的免疫染色，背景极低。

数量：

a. Hypoxyprobe?-1 CY 7试剂盒包含100 mg、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe?-1（哌莫地尔盐酸盐）。通常，动物研究中使用的剂量为60 mg/kg体重。

b. 一个小瓶（100 mg和200 mg试剂盒）或两个小瓶（1000 mg试剂盒）含有200微升的稀释的CY 7染料偶联IgG1大鼠单克隆抗体（克隆11.23.22.R）。每个小瓶含有200微升的0.50 mg/ml CY 7染料-MAb1溶液，溶剂为PBS，含1% BSA和0.09%叠氮化钠。CY 7染料-MAb1的最佳稀释度由研究人员确定，但发现1:50-100的稀释度在鼠肿瘤组织中能产生强烈的免疫荧光染色。CY 7染料-MAb1专为免疫荧光设计，可在荧光显微镜下或流式细胞术和西方印迹应用中观察。免疫荧光中的抗体稀释通常低于免疫过氧化物酶检测系统中使用的稀释度。

不提供：

用于免疫组织化学分析的标准试剂。

储存：

a. 将Hypoxyprobe?-1固体在室温下避光保存（也可在2-8°C避光保存）。

b. 将CY 7染料-MAb在2-8°C避光保存。请勿冷冻。

Hypoxyprobe?-1 CY 7 Kit检测说明：

正常或肿瘤组织缺氧的研究开始于静脉注射、腹腔注射或口服摄入Hypoxyprobe?-1（吡唑噻唑盐酸盐）溶液，剂量为60 mg/kg体重。对于25克的大鼠，这相当于1.5 mg/鼠。在小鼠中，已使用高达400 mg/kg的剂量，未检测到毒性或组织缺氧变化，但60 mg/kg的剂量在成本最低的情况下可获得良好的免疫染色。Hypoxyprobe?-1在盐水中的溶解度为116 mg/ml，因此可以使用非常小的体积来给药。注射或摄入后，Hypoxyprobe?-1会分布到所有组织，包括大脑，但仅在氧浓度低于14微摩尔（相当于37°C下的分压pO2 = 10 mm Hg）的细胞中与含巯基的蛋白质形成加合物。除了肿瘤外，肝脏、肾脏和皮肤等正常组织也含有pO2等于或低于10 mmHg的细胞，因此这些正常组织会结合Hypoxyprobe?-1。Hypoxyprobe?-1在小鼠体内的血浆半衰期约为25分钟。相比之下，大鼠的血浆半衰期为45分钟，狗为90分钟，人类为300分钟。感兴趣的大鼠组织可在Hypoxyprobe?-1给药后15到90分钟内收集。在收集时，组织中残留的Hypoxyprobe?-1会在组织缺氧时结合，但与组织在15到90分钟实验期间暴露于的Hypoxyprobe?-1量相比，残留的Hypoxyprobe?-1量非常少，因此由残留的Hypoxyprobe?-1引起的非特异性结合是不可检测的。

除了动物研究外，Hypoxyprobe?试剂盒还可以用于细胞培养。通常，细胞悬液在100到200微摩尔的Hypoxyprobe?-1存在下，在缺氧条件下孵育1到2小时。随后，细胞通过细胞离心收集，固定并用CY 7 MAb-1进行免疫染色。