MethylFlash 5-mC RNA甲基化ELISA简易试剂盒荧光法实现痕量m5C精准定量

产品概述

由艾美捷代理Epigentek推出的MethylFlash 5-mC RNA 甲基化 ELISA 简易试剂盒（荧光法）（货号：P-9009）是一套完整的优化缓冲液与试剂组合，用于以荧光法定量检测全局 5-甲基胞嘧啶（在 RNA 语境中更准确称为 m5C，即 5-甲基胞苷）RNA 甲基化水平。该试剂盒适用于从任何物种中分离的总 RNA，包括哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒，样本形式涵盖培养细胞、新鲜及冷冻组织、血浆/血清样本和体液样本等。

基于广受欢迎的 MethylFlash 定量技术，该试剂盒具有以下优势：

快速：整个流程仅需 2 小时 40 分钟。

稳健：试剂盒组分使检测具有大“信号窗口”，重复间变异更小。

便捷：固有低背景噪音，无需板封闭步骤。

灵敏：检测限可低至 200 ng 输入 RNA 中的 0.02% 5-mC RNA。

特异：对 5-mC 具有高特异性，在样本 RNA 指定浓度范围内，与未甲基化胞嘧啶或羟甲基化胞嘧啶均无交叉反应。

通用：阳性和阴性对照可检测任何物种的 5-mC RNA 甲基化。

准确：优化的阳性对照可按百分比比例分级，使检测更准确，且与 HPLC-MS 分析高度可比。

灵活：条孔微孔板格式，适用于手动或高通量分析。

背景知识

DNA 中的 5-甲基胞嘧啶（5-mC）由 DNA 甲基转移酶催化，在胞嘧啶环第 5 位碳原子上共价添加甲基基团而形成。该过程已被广泛研究，通常与基因表达抑制相关。研究还观察到，在人类中，5-mC 存在于多种 RNA 分子中，包括 tRNA、rRNA、mRNA 和非编码 RNA（ncRNA）。5-mC 在某些类别的 ncRNA 中似乎富集，而在 mRNA 中相对匮乏。5-mC 水平在动物基因组中差异较大，从某些昆虫中无法检测到的水平，到人类细胞中约占总 RNA 的 0.1%–0.45% 不等。大多数（83%）5-mC 位点存在于 mRNA 中。在这些转录本中，5-mC 在蛋白质编码序列内似乎匮乏，而在 5‘ 和 3’ UTR 中富集。已知 NSUN2 和 Dnmt2 两种不同的甲基转移酶可催化真核 RNA 中的 5-mC 修饰。

有强有力的证据表明，RNA 胞嘧啶甲基化影响多种生物过程的调控，如 RNA 稳定性和 mRNA 翻译。此外，vault RNA 中 5-mC 的缺失会导致其异常加工为 Argonaute 相关的小 RNA 片段，这些片段可作为 microRNA 发挥作用。因此，vault ncRNA 的加工受损可能与 NSun2 缺陷相关的人类疾病病因有关。

原理与操作流程

该试剂盒包含全局 5-mC RNA 甲基化定量所需的全部试剂。检测中，RNA 结合到经特殊处理、具有高核酸亲和力的条孔中。RNA 中的 5-mC 通过捕获抗体和检测抗体进行识别，随后通过微孔板分光光度计读取荧光进行定量。5-mC RNA 的百分比与测得的荧光强度成正比。

起始材料要求

输入 RNA 应高度纯净，260/280 比值大于 2.0，且相对无 DNA 污染。可使用 DNase I 去除 DNA。RNA 应溶于无 RNase 水中洗脱。每个反应的 RNA 用量范围为 50 ng 至 300 ng，推荐使用 200 ng RNA，此为获得最佳结果的优化输入量。

应用价值

该试剂盒是 RNA 表观遗传学研究的核心工具，适用于评估全局 RNA 甲基化水平、研究 m5C 修饰与 RNA 稳定性及翻译调控的关系、探索 NSUN2 和 Dnmt2 等甲基转移酶的功能，以及分析疾病相关 RNA 加工异常。其荧光法检测具有高灵敏度，仅需 200 ng RNA 即可实现 0.02% 的检测限，特别适合样本量有限的研究。与 HPLC-MS 高度可比的数据质量，使其成为 RNA 甲基化机制研究和生物标志物筛选的可靠选择。

文献参考

Suo X et. al. (April 2026). NSUN2-mediated GATM m5C methylation regulates creatine metabolism to drive mitochondrial fission and promote renal fibrosis. Cell Rep. 45(4):117253. PubMed: 41999600

Lu Y et. al. (December 2025). NSUN2 mediated-aberrant 5-methylcytosine methylation regulates autophagy-related ferroptosis in oral squamous cell carcinoma progression. Cell Death Dis. 16(1):903.

Chen J et. al. (December 2025). Flaviviridae RdRp exploits NSUN2-driven m5C methylation to establish persistent infection. PLoS Pathog. 21(12):e1013765.

Ma XH et. al. (October 2025). TET2 Deficiency Exacerbates Podocyte Injury and Mitophagy Disorder in Diabetic Nephropathy by Regulating M5C Methylation of Bcas3. FASEB J. 39(19):e70966.

Li M et. al. (September 2025). The oncogenic role of NSUN2 in lung adenocarcinoma by stabilizing CCT5 mRNA via a YBX1-dependent m5C modification. Mol Cell Biochem.