EpiQuik? 8-OHdG DNA 损伤直接定量试剂盒，无需DNA消化或水解，完整基因组DNA上样，完成快速检测

一、产品概述

由艾美捷代理Epigentek推出的EpiQuik? 8-OHdG DNA Damage Quantification Direct Kit（比色法）（货号：P-6003）是一套经过优化的完整试剂组合，用于通过比色法直接检测并定量氧化性DNA损伤标志物——8-羟基-2‘-脱氧鸟苷（8-OHdG）。该试剂盒适用于从多种物种（包括哺乳动物、植物、真菌、细菌及病毒）来源的DNA样本中进行直接检测，样本形式涵盖培养细胞、新鲜及冷冻组织、石蜡包埋组织以及体液样本。

本试剂盒具备以下核心优势：

操作简便快速：采用比色法检测，步骤清晰，全程仅需 3 小时 45 分钟 即可完成。

高灵敏度：最低检测限可达 2 pg 8-OHdG。

高特异性：仅识别 8-OHdG，与 8-OHdG 类似物无交叉反应。

直接检测完整DNA：无需DNA消化或水解，避免传统竞争法ELISA中高分子量化合物（如碳水化合物、蛋白质）的干扰。

结果准确性高：检测结果与HPLC或LC-MS分析方法高度相关且接近。

使用便捷：可直接使用从细胞或组织中提取的完整DNA，无需额外酶解或变性处理。

通用对照：提供通用型阳性和阴性对照，适用于任意物种的8-OHdG定量。

可拆卸微孔板：条孔设计，支持手动操作或高通量自动化分析。

条件稳定：实验条件简单、可靠、批间一致性好。

二、背景信息

8-羟基-2‘-脱氧鸟苷（8-OHdG，亦称8-oxo-dG）是脱氧鸟苷的氧化修饰产物，由细胞DNA中的羟基自由基、单线态氧及单电子氧化剂诱导产生。作为一种修饰性核苷碱基，8-OHdG 不仅因丰度高而备受关注，更因其在DNA复制过程中可引发 G→T 颠换突变 而具有致突变潜力。此外，8-OHdG 还能通过抑制 MBD 蛋白与 DNA CpG 位点的结合，参与基因激活/抑制的表观遗传调控。

目前，8-OHdG 被广泛接受为 氧化性DNA损伤和氧化应激的敏感性标志物。大量证据表明，8-OHdG 水平升高与电离辐射、工业化学品、空气污染、吸烟及癌症化疗等有害环境因素的暴露密切相关。

传统的检测方法（如 HPLC-ED 和 LC-MS）虽然可用于组织及细胞中 8-OHdG 的检测，但存在耗时长、通量低、成本高等缺陷。而目前市售的竞争法 ELISA 试剂盒在细胞/组织样本检测中准确性较差，且无法直接使用从细胞或组织中提取的完整DNA，应用受限。

本试剂盒有效解决了上述痛点。

三、检测原理与操作流程

3.1 原理

本试剂盒利用经特殊处理的高DNA亲和力微孔板条结合待测DNA样本。通过捕获抗体和检测抗体特异性识别并结合 DNA 上的 8-OHdG 修饰位点，随后经信号放大系统增强检测信号，最终在酶标仪下读取吸光度（比色法）。样本中 8-OHdG 的含量与测得的 OD 强度呈正比。

3.2 操作流程概要

1. DNA 结合：将待测DNA样本（100–300 ng）加入微孔板条中，室温孵育使DNA固定于孔底。

2. 抗体孵育：依次加入 8-OHdG 捕获抗体和检测抗体。

3. 信号放大与显色：加入增强剂及 TMB 底物，产生蓝色产物。

4. 终止与读数：加入终止液，颜色变为黄色，酶标仪在 450 nm 波长处读取吸光度。

5. 定量计算：根据标准曲线或阳性对照计算样本中 8-OHdG 的绝对含量或相对比例。

全程可在 3 小时 45 分钟 内完成。

四、起始样本与输入量要求

本试剂盒对起始 DNA 样本的要求如下：

DNA 投入量：每反应孔 100 ng 至 300 ng，推荐最优用量为 300 ng。

DNA 溶剂：可为水或 TE 缓冲液等常见核酸储存液。

样本类型：培养细胞、新鲜/冷冻组织、石蜡包埋组织、体液（如血清、尿液等）中提取的 DNA 均可直接使用，无需额外消化或水解处理。

注意：提取的 DNA 应尽量纯化，避免残留蛋白质、酚、氯仿等抑制因子，但无需去除基因组 DNA 中的高分子量化合物，因本试剂盒的直接法设计可避免此类干扰。

五、安全性及便捷性设计

本试剂盒将所有必要的试剂（包括阴性对照和阳性对照）集中包装，用户无需另行配制复杂溶液。相比传统方法，本产品具备以下安全与便捷优势：

无放射性：不使用同位素标记，实验条件安全。

无提取或色谱步骤：无需有机溶剂抽提或 HPLC/LC-MS 仪器，降低操作难度和设备成本。

无 DNA 消化/变性：直接使用完整 DNA，避免了酶解不彻底或热变性导致的样本损失。

即用型对照：提供的通用阳性对照可适用于任何物种的定量校准。

这些设计使得本试剂盒显著优于过时的竞争法ELISA或色谱法，尤其适合常规实验室的日常检测需求。

六、响应性、可靠性及实用性验证

基于其直接结合-双抗体夹心的原理及可拆卸微孔板形式，本试剂盒可切实应用于任何物种的多种样本类型。为验证其性能，生产方已成功使用该试剂盒对人肾脏、肝脏及小鼠脑组织来源的DNA进行了 8-OHdG 含量测定。结果表明：

本试剂盒测得的 8-OHdG 百分比（即 8-OHdG 占脱氧鸟苷总量的比例）与 HPLC 方法检测结果相似且具有可比性。

检测信号与 8-OHdG 浓度在 2 pg 至一定范围内呈良好线性关系（详见产品说明书附图）。

特异性验证显示，与 8-羟基鸟嘌呤（8-OHG）、8-羟基鸟苷（8-OHGua）等类似物无显著交叉反应。

因此，该试剂盒可作为一种 可靠、实用且经济高效 的替代方案，用于大规模评估不同条件下的氧化性DNA损伤水平。

七、试剂盒组成与储存

（以下为典型组分，具体以实际说明书为准）

组分 数量 储存条件

高亲和力微孔板 96 孔（可拆卸） 4°C

结合液 足够量 4°C

8-OHdG 捕获抗体 1 管 4°C

8-OHdG 检测抗体 1 管 4°C

增强剂 1 管 4°C

显色底物（TMB） 1 瓶 4°C，避光

终止液 1 瓶 4°C

阳性对照（8-OHdG 标准品） 1 管 -20°C

阴性对照 1 管 -20°C

洗涤液（浓缩） 1 瓶 4°C

未开封试剂盒按上述温度储存，有效期见标签。开封后微孔板条应密封于含干燥剂的铝箔袋中，建议 1 个月内使用完毕。

八、适用研究领域举例

环境毒理学：评估污染物（PM2.5、重金属、农药）暴露后生物体的 DNA 氧化损伤。

放射生物学：检测电离辐射或紫外线诱导的 8-OHdG 生成。

癌症研究：分析肿瘤组织中氧化应激水平，探索化疗药物或新型抗氧化剂的效应。

衰老与神经退行性疾病：测定阿尔茨海默病、帕金森病动物模型中的 DNA 氧化损伤程度。

心血管疾病：研究动脉粥样硬化、心肌缺血再灌注过程中的氧化性DNA损伤。

部分文献引用：

Godse S et. al. (November 2025). Curcumin-enhanced elvitegravir therapy mitigates neuroinflammation and cognitive deficits in EcoHIV mice. Exp Biol Med (Maywood). 250:10758.

Dudek A et. al. (July 2025). Metabolic and bariatric surgery reduces aging biomarkers in patients with obesity, independently of achieving optimal total weight loss. Wideochir Inne Tech Maloinwazyjne. 20(2):196-203.

Gallo-Soljancic P et. al. (July 2025). Dynamic Changes in Oxidative Stress and Epigenetic Modifications in the Ventral Mesencephalon and Striatum of MPTP-Treated Mice: Implications for Parkinson's Disease Pathogenesis. Neurotox Res. 43(4):30.