Ferroptosis ELISA Sampler Kit，全样本兼容型铁死亡ELISA采样套件解决方案

一、产品概述

Ferroptosis（铁死亡）是一种铁依赖性脂质过氧化驱动的调节性细胞死亡形式，在机制上与凋亡、坏死等经典细胞死亡途径存在本质区别。研究表明，铁死亡在癌症、神经退行性疾病及心血管疾病的发生发展中发挥关键作用。准确检测铁死亡通路中关键蛋白的表达水平，对于理解其调控机制及筛选治疗干预策略具有重要意义。

由艾美捷代理的Assay Genie 推出的 Ferroptosis ELISA Sampler Kit（货号：SKFI0019）是一款综合性试剂盒，专为同时检测血清、血浆及细胞培养上清等不同类型样本中多个铁死亡相关蛋白而设计。该试剂盒以 48 次检测规格（48 assays）提供，帮助研究人员快速启动铁死亡通路研究，识别并验证以下关键分析物：

SLC7A11 / xCT（胱氨酸/谷氨酸反转运体）

CD98（SLC7A11 辅助亚基）

Ferritin heavy chain（铁蛋白重链，铁储存蛋白）

KEAP1（Kelch 样 ECH 关联蛋白 1）

NFE2L2 / Nuclear Factor, Erythroid Derived 2 Like 2（即 Nrf2）

SLC11A2 / NRAMP2（二价金属转运蛋白）

该试剂盒具备高灵敏度与高特异性，可提供可靠且可重复的检测结果，是研究铁死亡机制及探索潜在治疗干预的实用工具。

二、试剂盒组分及储存条件

本试剂盒采用即用型设计，各组分分别提供并需按指定条件储存。具体组分及数量如下：

组分 数量 储存条件

ELISA 微孔板（可拆卸） 4–12 条 4°C，可保存 6 个月

冻干标准品 1 瓶 4°C 或 -20°C

样本/标准品稀释液 10 ml 4°C

生物素标记抗体（浓缩液） 60 μl 4°C，避光

抗体稀释液 5 ml 4°C

HRP-链霉亲和素复合物（SABC） 60 μl 4°C，避光

SABC 稀释液 5 ml 4°C

TMB 底物液 10 ml 4°C，避光

终止液 5 ml 4°C

洗涤液（25×） 15 ml 4°C

板贴 3 张 –

储存总则：所有组分按上表温度保存，未开封试剂盒在有效期内稳定。微孔板为可拆卸设计，可根据实验需要取用部分孔条，剩余孔条应密封后于 4°C 避光保存。

三、所需但未提供的材料与设备

进行 ELISA 实验时，需自行准备以下器材：

酶标仪（配备 450 nm 波长滤光片）

多通道移液器、单通道移液器、微量离心管及一次性吸头

恒温培养箱

去离子水或蒸馏水

吸水纸

缓冲液槽

四、实验原理概述

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA原理。微孔板预包被针对上述铁死亡靶标的捕获抗体，依次加入标准品或待测样本、生物素标记的检测抗体、HRP-链霉亲和素复合物（SABC）。经过多次洗涤后加入TMB底物，在HRP催化下产生蓝色，最终加终止液变为黄色。酶标仪在450 nm波长处读取吸光度，样本中目标蛋白浓度与吸光度值呈正相关。

由于本试剂盒为多种蛋白的采样组合形式（Sampler Pack），具体操作步骤（如加样量、孵育时间及温度、洗板次数等）请参照随试剂盒提供的详细操作手册。

五、注意事项

1. 样本兼容性：强烈建议初次使用本试剂盒时，对各类型样本进行预实验（如加标回收实验），以确认基质效应是否在可接受范围。

2. 冻融循环：所有样本应尽量避免反复冻融。建议单次用量分装，-80°C保存，取用后剩余样本不再回冻。

3. 溶血样本：溶血样本可能释放细胞内过氧化物酶或干扰物质，不适合用于本试剂盒。

4. 叠氮化钠：本试剂盒各组分中不含叠氮化钠（但不同批次以实际说明为准），如洗涤液中含有防腐剂，请遵循相应安全规范。

5. 操作一致性：为确保批内及批间重复性，建议每次实验均使用新鲜标准曲线，并严格控制孵育时间和温度。

6. 避光保存：生物素标记抗体、SABC及TMB底物均需避光保存，避免光降解影响检测灵敏度。

六、应用场景举例

癌症研究：检测肿瘤组织中 SLC7A11 和铁蛋白水平，评估铁死亡敏感性。

神经退行性疾病：在帕金森病、阿尔茨海默病模型中监测 Nrf2/KEAP1 通路变化。

心血管疾病：分析心肌缺血再灌注损伤中铁死亡相关蛋白的表达谱。

药物筛选：评估小分子化合物（如铁死亡诱导剂或抑制剂）对上述六种蛋白的调控效应。

七、储存及有效期

未开封试剂盒按组分表要求储存，有效期为 6 个月（自生产之日起，具体以标签为准）。

开封后，微孔板条应密封于含干燥剂的铝箔袋中，4°C 储存，建议 1 个月内使用完毕。

标准品复溶后建议单次使用，剩余未用完的标准品不建议再次冻存使用。