MBD2是MBD蛋白家族的成员。MBD2能够选择性地结合甲基化DNA,并通过招募转录抑制复合物来抑制甲基化靶基因的转录。作为一种能够识别甲基化CpG DNA的表观遗传“阅读器”蛋白,MBD2已被认证为癌症治疗的新靶点。此外,一些证据也表明该蛋白与神经发育有关。MBD2与甲基化DNA的结合活性可能会受到MBD2突变以及生化或药理干预的影响。选择性且强效的MBD2抑制可以诱导基因重新表达,这在癌细胞中MBD2基因破坏时已被观察到。因此,检测MBD2的结合活性及其抑制作用对于阐明基因激活和沉默的表观遗传调控机制至关重要,同时也有助于癌症和神经疾病治疗学的发展。
EpiQuik MBD2结合活性/抑制超敏检测试剂盒是一套完整的优化试剂,用于测量来自多种物种(包括哺乳动物、植物、真菌和细菌)的核提取物或纯化MBD2蛋白的MBD2结合活性或抑制情况,适用于多种形式的样本,包括但不限于培养细胞和新鲜/冷冻组织。
艾美捷Epigentek-EpiQuik MBD 2结合活性/抑制测定Ultra试剂盒(#P-3099-96)具有以下优势:
快速:比色法检测可在3小时内完成。
直接:在有无抑制剂的情况下直接测量MBD2结合活性。
用途广泛:适用于细胞/组织提取物或纯化的MBD2蛋白,可用于检测TET羟化酶抑制剂在体内和体外的效果。
灵敏:能够检测低至10 ng纯化MBD2蛋白的活性。
便捷:包含MBD2蛋白标准品,用于定量分析。
灵活:采用条板微孔板格式,支持手动或高通量分析。
原理与流程:
在此实验中,甲基化DNA被稳定地涂覆在微孔板孔中。活性MBD2蛋白能够结合到甲基化DNA上。结合的MBD2蛋白可以通过特异性抗体识别。结合的MBD2-抗体复合物的信号强度与结合活性成正比,可以通过增强剂放大,并通过在微孔板光谱光度计上以450 nm波长读取吸光度来进行比色法测量。MBD2的结合活性与测量到的光密度强度成正比。
左图:EpiQuik MBD2结合活性/抑制超敏检测试剂盒的流程示意图。
右图:使用MBD2蛋白标准生成的示例标准曲线。
起始材料与输入量:
输入材料可以是核提取物或纯化的MBD2蛋白。每个实验所需的核提取物量为2 ug至20 ug,最佳范围为5-10 ug。纯化蛋白的用量为10 ng至500 ng,具体取决于蛋白的纯度和催化活性。
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