精氨酸组蛋白甲基化是众多重要的表观遗传标记之一,对于多种细胞过程的调控至关重要。组蛋白H3(精氨酸2、17、26)和H4(精氨酸3)的精氨酸甲基化能够促进转录激活,这一过程由蛋白精氨酸甲基转移酶(PRMTs)家族介导。人类中有9种PRMTs,但只有7种被报道能够甲基化组蛋白。这些酶可以介导精氨酸残基的单甲基化或二甲基化。它们以S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)作为甲基供体,将其转移到精氨酸的胍基侧链上。根据甲基添加的位置,PRMTs可以分为I型(PRMT1、PRMT2、PRMT3、CARM1/PRMT4、PRMT6和PRMT8)和II型(PRMT5和PRMT9)。
Epigenase I型PRMT甲基转移酶活性/抑制检测试剂盒(比色法)是一套完整的必需组件,用于测量来自多种物种(包括哺乳动物、植物、真菌和细菌)的核提取物或纯化酶(如PRMT1至PRMT4)的总I型PRMT活性或抑制情况,适用于多种形式的样本,包括培养细胞和新鲜组织。
艾美捷Epigentek-表基因酶I型PRMT甲基转移酶活性/抑制测定试剂盒(比色法)(#P-3098-48)具有以下优势:
3小时比色法流程:采用96孔条板微孔板格式,可手动或高通量分析。
直接检测I型PRMT活性:通过简单检测PRMT转化的甲基化产物来直接测量I型PRMT活性。
适用于细胞/组织提取物和纯化I型PRMT:既可以使用细胞/组织提取物,也可以使用纯化的I型PRMT,从而能够在体内和体外检测I型PRMT抑制剂的抑制效果。
灵敏度高:检测限低至10 ng纯化的PRMT6酶。
包含甲基化H4-Arg3标准品:可用于定量I型PRMT的比活性。
准确、可靠且一致性高:背景信号极低。
原理与流程:
在此实验中,I型PRMT底物被稳定地涂覆在微孔板孔中。活性I型PRMT(如PRMT1-4、PRMT6和PRMT8)能够结合底物,并从Adomet转移甲基以甲基化底物。甲基化产物可以被特异性抗体识别。通过在微孔板光谱仪上以450 nm波长读取吸光度,可以比色法测量与酶活性成正比的甲基化产物的比例或量。I型PRMT酶的活性与测量到的光密度强度成正比。
左图:I型PRMT活性检测的灵敏度演示
通过使用重组PRMT1与Epigenase I型PRMT甲基转移酶活性/抑制检测试剂盒(比色法)进行实验,展示了I型PRMT活性检测的灵敏度。
右图:使用I型PRMT检测标准生成的示例标准曲线。
起始材料:
输入材料可以是核提取物或纯化的I型酶(如PRMT1至PRMT4)。每个实验所需的核提取物量为1 ug至20 ug,最佳范围为5 ug至10 ug。纯化酶的用量为10 ng至500 ng,具体取决于酶的纯度和催化活性。
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