MethylFlash全球 DNA甲基化（5-mC）ELISA 简易试剂盒（比色法）步骤精简，全程仅需 2 小时

MethylFlash Global DNA Methylation (5-mC) ELISA Easy Kit 是一套经过优化的缓冲液与试剂组合，可通过比色法在简化的“一步法”ELISA 反应中特异性地检测 5-甲基胞嘧啶（5-mC），从而定量全球 DNA 甲基化水平。与 LUMA、LINE-1、Alu 或 LTR 等方法相比，该试剂盒可直接、更快速地测定总体甲基化。作为 EpigenTek 专利技术的第四代升级版本，此试剂盒在速度、简便性、灵敏度和可重复性方面均较上一代 MethylFlash 进一步提升。

本试剂盒还特别设计与 MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation (5-hmC) ELISA Easy Kit（比色法）配对使用，可同时定量甲基化 DNA 和羟甲基化 DNA。

艾美捷MethylFlash全球 DNA甲基化（5-mC）ELISA 简易试剂盒（比色法）（#P-1030-48）优势与特点：

? 快速：步骤精简，全程仅需 2 小时

? 稳健：改良配方带来更大的“信号窗”，复孔间变异更小

? 便捷：背景噪声极低，无需 DNA 变性及封闭步骤

? 灵敏：最低可检测 100 ng DNA 中 0.05% 的甲基化 DNA

? 特异：对 5-mC 高度特异，在所测浓度范围内不与未甲基化胞嘧啶或 5-羟甲基胞嘧啶发生交叉反应

? 通用：包含阳性对照与阴性对照，可检测任何物种的单链或双链 DNA

? 准确：阳性对照可按比例梯度稀释，结果与 HPLC-MS 高度可比

? 灵活：条孔微孔板设计，可手动或高通量操作  

原理与流程：

试剂盒包含定量总体 DNA 甲基化所需的全部试剂。DNA 首先被固定在经特殊处理、具备高亲和力的条孔板中；随后使用特异性捕获抗体和检测抗体识别甲基化 DNA，并通过 TMB 底物显色。用酶标仪在 450 nm 读取吸光度，所得 OD 值与甲基化 DNA 百分比成正比。

起始材料：

输入 DNA 应保持相对纯净（260/280 > 1.6），可用水或 TE 缓冲液稀释。每孔 DNA 用量 5–200 ng，推荐使用 100 ng 以获得最佳结果。DNA 可来源于任何物种（哺乳动物、植物、真菌、细菌、病毒）及多种样本形式，包括但不限于：培养细胞、新鲜/冷冻组织、石蜡包埋组织、血浆/血清及体液。片段长度 200 bp 至全长、单链或双链 DNA 均可适用。

使用前请注意：

一、适用范围

MethylFlash? Global DNA Methylation (5-mC) ELISA Easy Kit（比色法）可用于检测来源于任何物种（哺乳动物、植物、真菌、细菌、病毒）的DNA整体甲基化水平。样本形式多样，包括但不限于：培养细胞、新鲜/冷冻组织、石蜡包埋组织、血浆/血清、体液等。单链或双链DNA均可使用，片段长度200 bp至全长皆可。

二、DNA用量

每孔DNA上样量为5–200 ng。为获得最佳定量效果，推荐上样量为100 ng。由于不同组织来源的DNA甲基化水平差异较大，且某些物种的甲基化DNA占总DNA比例可能低于1%，使用100 ng可确保结果可靠。

三、起始材料

可使用的起始材料包括：培养瓶或微孔板中的细胞、新鲜/冷冻组织、石蜡包埋组织、血浆/血清、体液等。

四、内部对照

试剂盒内同时提供阴性及阳性DNA对照，可绘制0.1%–5% 的标准曲线。鉴于不同组织、不同生理或病理状态下的整体甲基化水平差异较大，建议每个样本设复孔，以验证信号的可重复性。本试剂盒既可定量甲基化DNA的绝对含量，也可比较两份DNA样本间的相对甲基化水平。

五、操作注意事项

为避免交叉污染，请将样本或溶液准确加入条孔中。务必使用带滤芯的吸头，且每次移液后更换吸头。全程佩戴手套；如手套接触样本，应立即更换。