ALFA肽树脂是一种高亲和力树脂,可用于高效、纯净地纯化与NbALFA(单域抗体抗ALFA)融合的蛋白质。该树脂采用共价固定在4%琼脂糖或磁性琼脂糖微珠上的ALFA样肽段设计而成。
ALFA系统基于ALFA标签(一种高度通用的表位标签,其核心序列为SRLEEELRRRLTE)及其高亲和力结合伴侣NbALFA(单域抗体抗ALFA)。NbALFA是一种单域抗体(sdAb),解离常数约为26 pM。
ALFA肽树脂是专为选择性纯化与NbALFA融合的蛋白质而设计的亲和树脂。该树脂提供两种形式:基于4%交联琼脂糖或磁性琼脂糖。两种形式均采用固定的ALFA样肽段,能够高效、高特异性地捕获NbALFA及NbALFA标记的目的蛋白(POI)。洗脱在温和酸性条件(pH 3.0)下进行,通常可避免使用 harsh 变性剂或还原剂,从而保留敏感蛋白质的天然构象和功能。这使得ALFA肽树脂特别适用于需要功能完整、结构完整的蛋白质的应用。
两种ALFA肽树脂变体在结合和洗涤过程中与多种缓冲液配方兼容,并可耐受高浓度的常见去污剂和还原剂(详见实验方案),为定制化纯化流程提供了灵活性。由于ALFA样肽段通过共价连接,该树脂可承受多次再生循环和 harsh 的原位清洗(CIP)程序,而不会显著降低性能。
艾美捷ALFA肽树脂:
货号:N1530
生产来源:合成肽
应用:免疫沉淀(IP)
结合容量:结合容量取决于目标蛋白的流体动力学特性。例如:对NbALFA(14 kDa)的结合容量约为500 ?M(约7 mg/mL);对NbALFA–Halo融合蛋白(48 kDa)的结合容量约为400 ?M(约19 mg/mL)。
靶点:NbALFA
特异性:与NbALFA(单域抗体抗ALFA)特异性结合
制剂:50%浆液(PBS中含20%乙醇)
运输条件:环境温度
储存条件:4°C保存,有效期12个月。请勿冷冻!
注意:仅限体外研究使用。无毒、无危险、无传染性。

使用ALFA肽树脂(货号N1530)对NbALFA(单域抗体抗ALFA)进行亲和纯化的示例:将2.5 μM NbALFA加入大肠杆菌裂解液后,在室温下两次过柱0.5 mL ALFA肽树脂。结合后,用PBS洗涤树脂,并分别在单独实验中用pH 2.2(A)、pH 3.0(B)或pH 5.0(C)的柠檬酸钠缓冲液以五个柱体积进行流动洗脱。剩余结合蛋白用SDS样品缓冲液洗脱。通过SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色对指定馏分进行分析。pH 5.0洗馏分作为阴性对照。
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