突破氧化损伤检测瓶颈！抗8-OHdG抗体（克隆N45.1）IHC标准化操作指南

发布者：艾美捷科技发布时间：2025-08-25

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为何选择JaICA品牌的N45.1克隆抗8-OHdG抗体？

货号：MOG-020P/MOG-100P

·高特异性：靶向氧化DNA损伤关键标志物8-OHdG/8-oxo-dG

·多场景验证：兼容福尔马林/Bouin固定、石蜡/冰冻切片、培养细胞样本

·权威背书：日本免疫学会认证，实验方案经多篇SCI论文引用（Biol Pharm Bull, PLoS ONE）

实验全流程详解

实验条件应由每个用户确定。

阶段1：样本前处理

步骤	操作说明	关键参数
固定	新鲜组织用Bouin溶液固定（注：福尔马林样本需额外抗原修复）	配方：饱和苦味酸:甲醛:乙酸:H₂O=15:5:1:10 时间：过夜
脱蜡	石蜡包埋样本处理	试剂：二甲苯→梯度乙醇目的：完全去除石蜡
抗原修复 (仅福尔马林样本)	微波法： ① 载玻片浸入10mM柠檬酸盐缓冲液(pH6.0) ② 煮沸5分钟 ③ 自然冷却60分钟高压灭菌法：	温度/时间：微波：持续沸腾高压：121°C/10分钟注意：防止样本脱落！

阶段2：封闭与抗体孵育

步骤	操作说明	关键参数
封闭	涂布同源物种正常血清（例：二抗为兔抗小鼠IgG→用正常兔血清）	浓度：1:75稀释目的：阻断二抗非特异性结合小鼠样本必加：MOM试剂封闭内源IgG
一抗孵育	滴加抗8-OHdG单抗(克隆N45.1)	浓度：1-10ug/mL 条件：4°C过夜
二抗孵育	滴加生物素标记兔抗小鼠IgG	浓度：1:300稀释时间/温度：室温40分钟

阶段3：信号检测

关键注意事项

1. 固定方式决定流程

(1) + Bouin固定样本：无需抗原修复

(2) - 福尔马林样本：必须微波/高压修复

2. 抗体浓度动态优化

正常细胞基线水平低（10??/dG），建议预实验测试梯度浓度（1/5/10μg/mL）

3. 内源干扰封闭方案

高背景组织（肾/肝/肠）：

0.001% Avidin/PBS孵育10-15min → PBS洗 → 0.001% Biotin/PBS孵育10-15min → PBS洗

4. 显色系统选择

禁用HRP系统（H?O?产生假阳性）

强制使用AP系统（BCIP/NBT底物）

结果判读与验证