脂滴分离试剂盒，无需超速离心，小样本量适用

产品概述

由艾美捷代理Cell Biolabs推出的脂滴分离试剂盒（货号：MET-5011）提供了一种简便的梯度离心方法，用于从组织或培养细胞中分离完整脂滴。本试剂盒无需超速离心设备，亦不要求大样本量，即可高效获得高纯度脂滴。每套试剂盒配备足量试剂，可完成50次制备（基于50-100 mg组织或培养细胞样本）。

脂滴的生物学意义

脂滴是真核细胞中普遍存在的富含脂质的细胞器，其结构包括中性脂质核心、磷脂单分子层及外膜结合蛋白。传统认知中，脂滴主要承担中性脂质的储存与水解调控功能，并为细胞膜合成提供胆固醇和酰基甘油。

近年研究揭示脂滴参与更为广泛的生理病理过程：在非脂肪细胞中，脂滴通过将脂肪酸以中性甘油三酯形式储存，发挥抵御脂毒性的保护作用；同时，脂滴参与蛋白质结合与降解调控。此外，登革病毒、丙型肝炎病毒等病原体可利用脂滴进行复制，凸显了其在感染性疾病中的潜在角色。脂滴代谢异常与炎症反应、肥胖、动脉粥样硬化及肿瘤发生发展密切相关，使得脂滴分离成为代谢研究、肿瘤生物学及病毒学等领域的基础技术。

试剂盒组分与储存

本试剂盒常温运输，收到后请将所有组分于4℃直立储存，避免泄漏：

组分 | 规格

试剂A | 10 mL

10× 试剂B | 7 mL

需自备材料

15 mL锥形聚丙烯离心管

2 mL微量离心管

27号针头及3 mL注射器

玻璃匀浆器或其他组织匀浆装置

操作流程

1. 样本匀浆

将50-100 mg组织或培养细胞沉淀置于合适容器中

加入适量试剂A，使用玻璃匀浆器充分匀浆至均一悬液

2. 梯度制备与离心

按说明书比例将匀浆液与试剂B混合，在15 mL离心管中形成密度梯度

于4℃条件下离心（具体转速与时间请参照产品说明书）

3. 脂滴回收

离心后，脂滴由于密度较低将浮于梯度顶层

使用移液器小心从液面顶部吸取脂滴层

将回收的脂滴转移至新的微量离心管中，可进一步进行蛋白质分析、脂质组学或功能实验

数据解读与质控建议

1. 纯度评估：建议使用油红O或尼罗红染色观察分离产物的脂滴富集程度，同时以Western blot检测脂滴标志蛋白（如Perilipin、ADRP）评估纯度

2. 产量计算：可配合脂质定量试剂盒（如STA-613比色法或STA-617荧光法）测定脂滴中甘油三酯或胆固醇含量

3. 活性保存：分离后的脂滴应尽快分析，如需保存建议在-80℃冻存并添加蛋白酶抑制剂

4. 样本匹配：建议同时留存部分匀浆上清，用于计算脂滴中特定蛋白或脂质的相对富集倍数

应用场景

本试剂盒适用于：脂肪组织与肝组织脂滴分离、细胞模型中脂滴动态变化研究、脂滴相关蛋白鉴定、以及病毒感染与脂滴相互作用机制探究等实验需求。

文献参考

1. Thiam A.R., Farese R.V. Jr, and Walther T.C. (2013) Nature Rev. 14, 775-786.

2. Martin S. and Parton R.G. (2006) Nature Rev Mol. Cell Biol.7:373-378.

3. Greenberg, Andrew S.; Coleman, Rosalind A.; Kraemer, Fredric B.; McManaman, James L.; Obin,Martin S.; Puri, Vishwajeet; Yan, Qing-Wu; Miyoshi, Hideaki; Mashek, Douglas G. (2011).Journal of Clinical Investigation 121: 2102–2110.

4. Brasaemle, D. L. (2007). J. Lipid Res. 48: 2547–2559.

5. Bartz, R.; Li, W.-H.; Venables, B.; Zehmer, J. K.; Roth, M. R.; Welti, R.; Anderson, R. G. W.; Liu,P.; Chapman, K. D. (2007). J. Lipid Res. 48: 837–847.