牛磺酸检测试剂盒，双加氧酶偶联显色

产品概述

由艾美捷代理Cell Biolabs推出的牛磺酸检测试剂盒（货号：5071）提供了一种简便的比色法，用于定量检测食品或生物样本中的游离牛磺酸含量。本试剂盒采用96孔板形式，通过牛磺酸双加氧酶催化反应及特异性显色探针，实现高灵敏度检测（检测限低至15.6 uM）。每套试剂盒可完成200次检测（含空白对照、标准品、背景对照及待测样品），足以开展多批次实验。

牛磺酸的生物学意义

牛磺酸（2-氨基乙磺酸）是广泛存在于动物组织中的含磺酸基小分子，约占人体体重的0.1%。与多数含羧基的有机酸不同，牛磺酸为磺酸，其磺酸基团pKa值较低，在肠道内保持负电荷状态，这一特性使其在胆汁酸结合中发挥关键作用。生物体内，牛磺酸经胰腺中一系列酶促反应由半胱氨酸合成：半胱氨酸依次经双加氧酶氧化为半胱氨酸亚磺酸，经磺基丙氨酸脱羧酶脱羧形成亚牛磺酸，再经亚牛磺酸脱氢酶氧化生成牛磺酸。

牛磺酸在哺乳动物中具有多重重要功能。其与鹅去氧胆酸和胆酸结合形成牛磺鹅去氧胆酸钠和牛磺胆酸钠，这些胆汁盐作为高效洗涤剂促进脂类消化吸收。值得特别注意的是，本试剂盒仅检测游离牛磺酸，结合态（如结合于初级胆汁酸）牛磺酸不参与显色反应，从而排除了共轭形式对游离牛磺酸定量的干扰。

检测原理

本试剂盒的检测原理基于以下酶促反应路径：在辅助因子存在下，牛磺酸双加氧酶将牛磺酸氧化为1-羟基-2-氨基乙磺酸，该中间体自发分解为氨基乙醛和亚硫酸盐。反应通过加入EDTA（牛磺酸双加氧酶抑制剂）终止后，以高特异性比色硫醇探针检测亚硫酸盐生成量。样品与标准品在同一96孔板中平行测定，通过标准曲线计算待测样品中牛磺酸浓度。

试剂盒组分与储存

本试剂盒包含两个运输包装，收到后请按要求储存：

Box 1（室温运输）

-牛磺酸标准品：100 uL，100 mM

-10× 检测缓冲液：10 mL

-10× 试剂A：1 mL

-10× 试剂B：1 mL（琥珀色管）

-辅助因子：250 mg（琥珀色管）

-终止液：5 mL

-淬灭液：5 mL

Box 2（蓝冰运输）

-10× 牛磺酸双加氧酶：1 mL（重组酶，源自大肠杆菌）

-显色液：10 mL

储存要求： 牛磺酸标准品、牛磺酸双加氧酶及显色液于-20℃保存；其余组分于4℃保存。

操作流程

1. 样品制备

食品样本需经适当前处理（如匀浆、提取等）后，用1× PBS稀释

生物样本（如血清、组织匀浆）可直接使用或适当稀释

建议样品为澄清溶液，避免颗粒物干扰

2. 标准曲线配制

以去离子水或1× PBS稀释牛磺酸标准品（100 mM），制备系列浓度梯度（建议范围：15.6-1000 uM）

每个浓度设2个复孔

3. 酶反应与显色

按说明书配制反应混合液（含检测缓冲液、试剂A、试剂B、辅助因子及牛磺酸双加氧酶）

每孔加入样品或标准品，37℃孵育适当时间

每份样品需设置两个平行反应孔：分别加入终止液或淬灭液（详见"数据计算"说明）

4. 信号读取

加入显色液，室温孵育

以标准96孔板比色读数仪读取吸光度

数据计算与质控建议

关键计算步骤： 每份样品需设置2个反应孔——终止液处理孔（测定总信号）和淬灭液处理孔（测定背景信号）。样品牛磺酸含量 = 终止液孔OD值 ? 淬灭液孔OD值。通过标准曲线计算样品中游离牛磺酸浓度。

质控建议：

1. 标准曲线：每次实验重新配制标准品，确保R? ≥ 0.99

2. 背景控制：每个样品需设淬灭液对照，扣除背景信号

3. 加标回收实验：建议对部分样品进行牛磺酸加标回收实验，验证基质是否对检测存在干扰

4. 样品稀释：若样品OD值超过标准曲线上限，需稀释后重新检测

应用场景

本试剂盒适用于：食品及营养补充剂中牛磺酸含量测定、动物组织及体液中游离牛磺酸水平检测、牛磺酸代谢相关疾病（如心血管疾病、神经系统疾病）研究，以及牛磺酸补充效果评估等领域。