腺苷检测试剂盒，适用于甲基化代谢，嘌呤代谢及能量代谢网络的综合性研究

产品概述

由艾美捷代理Cell Biolabs推出的腺苷检测试剂盒（货号：MET-5090）提供了一种简便的荧光法，用于定量检测生物样本中的总腺苷含量。本试剂盒采用96孔板形式，通过腺苷脱氨酶偶联酶促反应及高特异性荧光探针，实现高灵敏度检测（检测限低至1.56 uM）。每套试剂盒可完成100次检测（含空白对照、腺苷标准品及待测样品），适用于神经科学、心血管研究及代谢调控等多领域应用。

腺苷的生物学意义

腺苷是一种嘌呤核苷，由腺嘌呤通过β-N9-糖苷键与核糖分子连接而成。其衍生物在能量转移反应（如ATP和ADP）和信号转导（如cAMP）中发挥核心作用。此外，腺苷作为神经调质，参与睡眠促进和觉醒抑制；通过血管舒张调节多器官血流；同时也是S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）在腺苷同型半胱氨酸酶催化下转化为同型半胱氨酸的副产物。

在心血管系统中，腺苷可暂时阻滞心脏房室结传导，并松弛动脉壁平滑肌。由于腺苷对正常动脉段的扩张作用优于病变段，临床利用这一差异进行冠状动脉阻塞检测；对疑似室上性心动过速患者，腺苷有助于鉴别诊断并可能终止某些类型的室上速及房性心动过速。在无法耐受运动负荷试验的患者中，腺苷联合铊-201或锝-99m心肌灌注显像用于冠心病风险评估。

检测原理

本试剂盒采用酶偶联荧光法检测腺苷，反应路径如下：腺苷经腺苷脱氨酶（ADA）转化为肌苷；肌苷经嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）转化为次黄嘌呤；次黄嘌呤经黄嘌呤氧化酶（XO）转化为黄嘌呤和过氧化氢。生成的过氧化氢与高特异性荧光探针在辣根过氧化物酶（HRP）催化下以1:1结合，产生荧光信号。样品与标准品在同一96孔板中平行测定，通过标准曲线计算样品中腺苷浓度。

试剂盒组分与储存

本试剂盒蓝冰运输，收到后请将全部组分于-20℃储存：

组分 | 规格

腺苷标准品 | 50 uL，10 mM

10× 检测缓冲液（500 mM磷酸钠，pH 7.4） | 25 mL

荧光探针（溶于DMSO） | 50 uL |

HRP（100 U/mL，甘油溶液） | 10 uL

腺苷脱氨酶（1000 U/mL） | 10 uL

嘌呤核苷磷酸化酶（18.9 U/mL） | 500 uL

黄嘌呤氧化酶（2.5 U/mL） | 100 uL

酶活单位定义： ADA：pH 7.5、25℃下每分钟脱氨1.0 ?mol腺苷；PNP：pH 7.4、25℃下每分钟使1.0 ?mol肌苷磷酸解；XO：pH 7.5、25℃下每分钟转化1.0 umol黄嘌呤为尿酸（以次黄嘌呤为底物时活性约50%）。

操作流程

1. 样品制备

生物样本（血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等）需澄清，避免颗粒物干扰

建议使用去蛋白处理（如超滤或高氯酸沉淀中和）去除干扰物质

若样品浓度超出标准曲线范围，需用1×检测缓冲液适当稀释

2. 标准曲线配制

以1×检测缓冲液稀释10 mM腺苷标准品，制备系列浓度梯度（建议范围：1.56-100 uM）

建议每次实验新鲜配制标准品

3. 双孔差减检测

每份样品需设置2个平行反应孔：+ADA孔（含腺苷脱氨酶）和?ADA孔（不含腺苷脱氨酶）

按说明书配制反应混合液，加入样品或标准品

室温孵育15分钟后，以荧光读板仪读取信号（激发/发射波长请参照产品说明书）

4. 信号读取

建议采用终点法读取

确保孔底无气泡，以免影响读数准确性

数据计算与质控建议

关键计算步骤： 样品腺苷含量 = (+ADA孔荧光值) ? (?ADA孔荧光值)。?ADA孔反映背景干扰信号，差值即为腺苷特异性信号。通过标准曲线（RFU vs. 腺苷浓度）计算样品浓度。

质控建议：

1. 标准曲线：每次实验重新配制，确保R² ≥ 0.99

2. 酶活性验证：若标准曲线信号偏低，需检查各酶组分是否在有效期内，PNP和XO储存于-20℃避免反复冻融

3. 加标回收实验：建议对部分样品进行腺苷加标回收实验（如添加5 uM或10 uM标准品），回收率应在80%-120%范围内

4. 内源性干扰：样品中还原性物质（如谷胱甘肽、抗坏血酸）可能干扰探针信号，建议做适当稀释验证

5. 反应时间控制：15分钟为推荐孵育时间，可根据信号强度适当延长但各样品需保持一致

应用场景

本试剂盒适用于：神经科学中腺苷水平与睡眠-觉醒调控研究、心血管疾病中腺苷信号与血流调控机制探究、代谢性疾病中腺苷代谢通路异常分析，以及药物筛选评估化合物对腺苷水平影响等领域。配套产品如肌苷检测试剂盒（MET-5092）、SAH和SAM ELISA试剂盒可联合使用，系统研究腺苷代谢网络。

文献参考

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