Bioauxilium THUNDER全BTK TR-FRET细胞信号检测试剂盒验证数据说明

总BTK检测试剂盒是一种均相时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）夹心免疫分析法（见图1）。THUNDER?细胞信号分析工作流程包括3个步骤（见图2）。细胞经过处理后，首先使用试剂盒提供的特异性裂解缓冲液对细胞进行裂解。然后，通过一对荧光标记抗体以简单的“添加-孵育-测量”格式（单步试剂添加；无需洗涤步骤）检测细胞裂解液中的总BTK。其中，一个抗体标记有供体荧光团（铕螯合物；Eu-Ab1），另一个标记有远红接受体荧光团（FR-Ab2）。两个标记抗体与目标蛋白上不同的表位结合，使两种染料靠近。用闪光灯（320或340纳米）或激光（337纳米）激发供体铕螯合物分子，会触发从供体到接受体分子的FRET，进而发出665纳米的TR-FRET信号。铕螯合物残留的能量会在615纳米处产生光。665纳米处的信号与细胞裂解液中总BTK的浓度成正比。数据可以表示为665纳米处的信号，或665纳米/615纳米的比值。

作为BioAuxilium在中国区域合作伙伴，艾美捷科技强烈推荐BioAuxilium热销产品THUNDER全BTK TR-FRET细胞信号检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

THUNDER全BTK TR-FRET细胞信号检测试剂盒组分：

Eu-总BTK（5微升）

Acc-总BTK（20微升）

BTK对照裂解液（100微升）

5X裂解缓冲液2（1毫升）

10X TR-FRET检测缓冲液（50微升）

10X磷酸酶抑制剂混合液（50微升）

验证数据：

该分析试剂盒已通过2板分析协议验证，可用于相对定量Raji细胞裂解液中的总BTK。

非贴壁细胞在RPMI+10%胎牛血清中培养，之后离心并用无血清RPMI重悬至所需密度。

细胞经过处理后，用5X裂解缓冲液2（最终浓度为1X）裂解细胞，并加入100X磷酸酶抑制剂混合液（稀释至5X）。

在室温下于轨道振荡器（400转/分钟）孵育30分钟后，将裂解液（15微升）转移至384孔分析板中，然后加入标记抗体Eu-Ab1和FR-Ab2（5微升）以检测总BTK。

在室温下孵育4小时后，记录665纳米和615纳米处的TR-FRET信号（EnVision?；灯激发）。

BioAuxilium成立于2013年，基于其专有的TR-FRET技术，开发出了数百个用于细胞蛋白和生物标志物定量分析的Thunder系列TR-FRET检测试剂盒。该公司专注于设计、开发和生产高质量、经过充分验证的TR-FRET检测试剂盒，简化实验室工作流程，加速生物医学研究。

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