总BTK检测试剂盒是一种均相时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)夹心免疫分析法(见图1)。THUNDER?细胞信号分析工作流程包括3个步骤(见图2)。细胞经过处理后,首先使用试剂盒提供的特异性裂解缓冲液对细胞进行裂解。然后,通过一对荧光标记抗体以简单的“添加-孵育-测量”格式(单步试剂添加;无需洗涤步骤)检测细胞裂解液中的总BTK。其中,一个抗体标记有供体荧光团(铕螯合物;Eu-Ab1),另一个标记有远红接受体荧光团(FR-Ab2)。两个标记抗体与目标蛋白上不同的表位结合,使两种染料靠近。用闪光灯(320或340纳米)或激光(337纳米)激发供体铕螯合物分子,会触发从供体到接受体分子的FRET,进而发出665纳米的TR-FRET信号。铕螯合物残留的能量会在615纳米处产生光。665纳米处的信号与细胞裂解液中总BTK的浓度成正比。数据可以表示为665纳米处的信号,或665纳米/615纳米的比值。
作为BioAuxilium在中国区域合作伙伴,艾美捷科技强烈推荐BioAuxilium热销产品THUNDER全BTK TR-FRET细胞信号检测试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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THUNDER全BTK TR-FRET细胞信号检测试剂盒 | KIT-BTKT-100 | 查看 |
THUNDER全BTK TR-FRET细胞信号检测试剂盒组分:
Eu-总BTK(5微升)
Acc-总BTK(20微升)
BTK对照裂解液(100微升)
5X裂解缓冲液2(1毫升)
10X TR-FRET检测缓冲液(50微升)
10X磷酸酶抑制剂混合液(50微升)
图1 TR-FRET细胞信号分析原理示意图。 |
图2 使用2板(转移)协议的分析工作流程。 |
验证数据:
该分析试剂盒已通过2板分析协议验证,可用于相对定量Raji细胞裂解液中的总BTK。
非贴壁细胞在RPMI+10%胎牛血清中培养,之后离心并用无血清RPMI重悬至所需密度。
细胞经过处理后,用5X裂解缓冲液2(最终浓度为1X)裂解细胞,并加入100X磷酸酶抑制剂混合液(稀释至5X)。
在室温下于轨道振荡器(400转/分钟)孵育30分钟后,将裂解液(15微升)转移至384孔分析板中,然后加入标记抗体Eu-Ab1和FR-Ab2(5微升)以检测总BTK。
在室温下孵育4小时后,记录665纳米和615纳米处的TR-FRET信号(EnVision?;灯激发)。
BioAuxilium成立于2013年,基于其专有的TR-FRET技术,开发出了数百个用于细胞蛋白和生物标志物定量分析的Thunder系列TR-FRET检测试剂盒。该公司专注于设计、开发和生产高质量、经过充分验证的TR-FRET检测试剂盒,简化实验室工作流程,加速生物医学研究。
作为BioAuxilium在中国区域合作伙伴,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAuxilium产品以及客户订制化服务,欢迎大家随时联系我们。
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