欢迎您访问武汉艾美捷科技有限公司官方网站!
站点地图 服务热线:400-6800-868
  • 产品
  • 文章

PRODUCT CENTER

特色产品

当前位置:首页 > 特色产品

BioAuxilium/THUNDER 磷酸化BTK (Y223)时间分辨荧光共振能量转移细胞信号检测试剂盒

发布者:艾美捷科技    发布时间:2025-02-20     
分享到:

磷酸化BTK (Y223) 检测试剂盒是一种均相的时间分辨福斯特共振能量转移(TR-FRET)夹心免疫分析。THUNDER?细胞信号检测工作流程包括三个步骤(见图2)。在细胞处理后,首先使用试剂盒中提供的特定裂解缓冲液对细胞进行裂解。然后,在简单的“添加-孵育-测量”格式中,利用一对荧光标记抗体检测细胞裂解液中的磷酸化BTK (Y223)(单步试剂添加,无需洗涤步骤)。其中一种抗体用供体荧光染料(铕螯合物;Eu-Ab1)标记,另一种则用远红色受体荧光染料(FR-Ab2)标记。

 

艾美捷BioAuxilium-THUNDER 磷酸化BTK (Y223)时间分辨荧光共振能量转移细胞信号检测试剂盒#KIT-BTKP-100检测原理:

这两种标记抗体与目标蛋白上不同的表位结合,发生在溶液中,使两种染料靠近。用闪光灯(320或340 nm)或激光(337 nm)激发供体铕螯合物分子后,会触发从供体到受体分子的FRET,进而在665 nm处发出TR-FRET信号。铕螯合物残余能量会在615 nm处产生光信号。665 nm处的信号与细胞裂解液中磷酸化BTK (Y223) 的浓度成正比。数据可以表示为665 nm处的信号或665 nm与615 nm的比值。

 

试剂盒组成:

Eu-Phospho-BTK(5 ?L)

Acc-Phospho-BTK(20 ?L)

BTK对照裂解液(500 ?L)

5倍裂解缓冲液2(1 mL)

10倍TR-FRET检测缓冲液(50 ?L)

100倍磷酸酶抑制剂混合液(50 ?L)

 

互补试剂:

THUNDER?裂解缓冲液2(5倍)

THUNDER? TR-FRET检测缓冲液(10倍)

THUNDER?磷酸酶抑制剂混合液(100倍)

 

验证数据:

本试剂盒已通过验证,可用于使用2板检测协议对Raji细胞裂解液中磷酸化BTK(Y223)的相对定量检测。

细胞培养:非贴壁细胞在RPMI+10% FBS中培养,随后经过离心并重悬于无血清的RPMI中,达到所需密度。

细胞处理:细胞处理后,使用5倍裂解缓冲液2(最终浓度为1倍)裂解细胞,裂解缓冲液中补充了稀释5倍的100倍磷酸酶抑制剂混合液。

孵育与检测:在室温下于振荡器(400 rpm)孵育30分钟后,将裂解液(15 ?L)转移至384孔检测板,并加入标记抗体Eu-Ab1和FR-Ab2(5 ?L)用于检测磷酸化BTK(Y223)。

信号读取:在室温孵育4小时后,记录665 nm和615 nm处的TR-FRET信号(EnVision?)。

 

实验数据:

THUNDER 磷酸化BTK (Y223)时间分辨荧光共振能量转移细胞信号检测试剂盒

在96孔细胞培养板中,Raji细胞(每孔20万细胞,三重复)与Pervanadate的系列稀释液在37℃下孵育30分钟。数据显示,Pervanadate处理可刺激Raji细胞中BTK在Y223位点的磷酸化。

Raji细胞(每孔20万细胞,三重复)与Ibrutinib的系列稀释液在37℃下孵育60分钟,随后用150 ?M Pervanadate在37℃下刺激30分钟。数据显示,Ibrutinib处理可抑制Pervanadate诱导的Raji细胞中BTK在Y223位点的磷酸化。

Raji细胞(每孔20万细胞)分别在有无200 ?M Pervanadate的条件下在37℃下孵育30分钟。每组处理使用48个孔来确定Z'因子值。Z'因子值为0.74,表明该检测方法稳健且适用于高通量筛选(HTS)。

Phospho-BTK (Y223)检测试剂盒常规测试使用Pervanadate处理的Raji细胞裂解液。Raji细胞经培养、离心后,以1000万细胞/mL的密度重悬,并用200 ?M Pervanadate在37℃下刺激30分钟。细胞裂解后,用5倍裂解缓冲液2(最终浓度:1倍)对裂解液进行系列稀释,并进行三重复检测。数据显示,裂解液稀释度与TR-FRET比值呈线性关系。

 

艾美捷科技是BioAuxilium的中国区域合作伙伴,为科研工作者提供优质的产品与服务。


  • 高品质保障 成熟的生产研发技术
  • 高性价比 价宜质优,性价比高
  • 高效省心 从购买到使用,放心无忧
  • 安全运输 完善的保护措施安全运输

微信扫码在线客服

微信咨询

全国免费技术支持

400-6800-868

在线客服