生物素化纤连蛋白--长链生物素标记，低空间位阻，适配基质组装与力学研究

一、背景介绍

细胞外基质（ECM）由胶原蛋白、非胶原糖蛋白和蛋白聚糖组成。这些成分由细胞分泌，形成围绕细胞和组织的 ECM 网络。ECM 调控细胞功能的诸多方面，包括细胞动态行为、细胞骨架组织和细胞间通讯。

纤连蛋白是一种存在于细胞外基质和血浆中的高分子量（约 440 kDa）糖蛋白，由两个亚基组成，亚基大小因选择性剪接而在 235–270 kDa 之间变化。分泌型纤连蛋白二聚体为可溶性蛋白，在 ECM 中聚合成高级纤维结构。纤连蛋白在细胞黏附、生长、迁移、肌动蛋白动态和分化中发挥重要作用，对伤口愈合和胚胎发育等过程至关重要。这些功能大多通过纤连蛋白与整合素受体蛋白结合来介导。纤连蛋白表达、降解和组织的异常与多种病理过程相关，包括癌症和纤维化。除整合素外，纤连蛋白还可结合胶原蛋白、纤维蛋白和硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（如 syndecans）等细胞外基质成分。

二、产品描述

由艾美捷代理Cytoskeleton推出的生物素化纤连蛋白（Fibronectin-Biotin）（货号：FNR03）应用方向：

力学生物学与组织工程研究

纤连蛋白基质组装观察

材料说明：

纤连蛋白从牛血浆中纯化，为高分子量（约 440 kDa）糖蛋白，由两个亚基组成，亚基大小因选择性剪接而在 235–270 kDa 之间变化。分泌型纤连蛋白二聚体为可溶性蛋白，在细胞外基质中聚合成高级纤维结构。

该蛋白经修饰，在随机表面赖氨酸位点共价连接长链生物素；采用长链生物素可避免下游应用中的空间位阻。

标记化学计量：每个纤连蛋白二聚体约 1–3 个生物素

以冻干粉形式提供

三、纯度

蛋白纯度通过 4–20% 聚丙烯酰胺凝胶上 Coomassie 蓝染色蛋白的扫描密度测定法确定，FNR03 纯度大于 80%。

四、生物活性检测

FNR03 的生物活性通过其可溶性试剂掺入细胞外纤维状基质的能力来测定。该实验是响应多种信号事件进行基质组装定量的非放射性替代方法。

批间标记效率通过碱性磷酸酶偶联链霉亲和素检测 10 ng 生物素化纤连蛋白的能力进行评估。

五、储存与复溶

常温运输。冻干蛋白在 4°C、湿度低于 10%、避光条件下可稳定保存 6 个月。

复溶时，请短暂离心使产品收集至管底，用 20 ul 室温蒸馏水重悬至 1 mg/ml。让蛋白重新溶解 1–2 分钟，期间不要混匀；1–2 分钟后，可轻柔吹打 2–3 次以确保完全重悬。应避免过度混匀，否则可能导致蛋白聚集。重悬后将产品置于冰上。

复溶后，蛋白处于以下缓冲液中：20 mM Tris-HCl pH 7.6、20 mM NaCl、0.1 mM EDTA、15 mM BME 及 5%（w/v）蔗糖。浓缩蛋白应按实验用量分装，液氮速冻后储存于 -70°C，在此条件下可稳定保存 6 个月。

工作浓度稀释时，应将生物素化纤连蛋白用适当缓冲液或组织培养基进一步稀释。生物素化纤连蛋白是一种不稳定蛋白，操作时需格外小心，避免反复冻融。

文献参考

1. Guidebook to the extracellular matrix and adhesion proteins.1993. Oxford University Press. Ed. Kreis T and Vale R.

2. Pankov R, Yamada KM . 2002. "Fibronectin at a glance".Journal of Cell Sci. 20 115: 3861-3863.

3. Williams CM, Engler AJ, Slone RD, Galante LL, SchwarzbauerJE. 2008. “Fibronectin expression modulates mammary epithelial cell proliferation during acinar differentiation. Cancer Research. 9 68: 3185-8192.

4. Pankov R and Yamada KM. 2004. Non-radioactive quantification of fibronectin matrix assembly. Curr. Protocols in Cell Biol.S25, 10.13.1—10.13.9.

5. Lehnert M, et al. 2011. Adsorption and conformation behaviorof biotinylated fibronectin on streptavidin-modified TiO(X)surfaces studied by SPR and AFM. Langmuir, 27, 7743-7751.