一、关于微管蛋白
微管蛋白由两个密切相关的 55 kDa 蛋白——α 微管蛋白和 β 微管蛋白——组成的异二聚体构成。这两种蛋白由各自独立的基因或小基因家族编码,其序列在整个真核生物界高度保守。因此,从猪脑组织中分离的微管蛋白与大多数真核来源的微管蛋白高度同源。这一特性带来了重要的技术优势:猪源微管蛋白可用于检测来自多种不同物种的蛋白。
微管蛋白聚合并形成称为微管(MTs)的结构。微管蛋白聚合时,首先形成原纤维。微管由 13 条原纤维组成,直径约 25 nm。每微米微管长度由 1650 个异二聚体构成。微管是高度有序的结构,具有内在极性。
二、产品描述
由艾美捷代理Cytoskeleton推出的HiLyte 647荧光标记微管蛋白,猪脑来源(货号:TL670M)应用方向:
体外驱动蛋白运动实验的荧光微管底物
体外微管动态研究
分析 MAPs 及药物对体外微管动态的影响
材料说明:
微管蛋白 T240 通过 HiLyte 647 活化酯在随机表面赖氨酸位点进行标记。
激发波长:649 nm,发射波长:674 nm——远红光光谱
标记化学计量:每个微管蛋白异二聚体约 0.1–0.2 个染料
以冻干粉形式提供
三、纯度
蛋白纯度通过 12% 聚丙烯酰胺凝胶上 Coomassie 蓝染色蛋白的扫描密度测定法评估,纯度大于 99%。
四、生物活性检测
TL670M 微管蛋白保留高生物活性,体外聚合实验中超过 80% 可聚合成微管,经离心沉降实验证实。该性能与未修饰微管蛋白相当。
五、储存与复溶
冻干材料的推荐储存条件为 4°C、湿度低于 10%、避光。在此条件下,蛋白可稳定保存 1 年。冻干蛋白也可在 -70°C 干燥条件下储存,稳定保存 1 年。
复溶时,请短暂离心使产品收集至管底,应可见淡蓝色沉淀。用 2 ul 水或含 GTP 的 General Tubulin Buffer(G-PEM)重悬至 10 mg/ml。在 G-PEM 中的浓缩蛋白可液氮速冻后于 -70°C 储存,稳定保存 6 个月。
注意事项: 使用液氮速冻微管蛋白非常重要,其他冷冻方法会导致活性显著降低。复溶时,将样品置于室温水浴中 1 分钟快速解冻。避免反复冻融。
六、纯度验证
用于 TL670M 的蛋白经 Coomassie 染色的 SDS-PAGE 分析确定纯度大于 99%。为确认是否存在游离染料,将 25 ug 蛋白样品上样至 SDS 凝胶,并在橙光下拍照。未掺入的染料会在染料前沿处可见。

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