BioAssay Systems【干冰】EnzyChrom NADP+/NADPH检测试剂盒，高通量，每天可处理数千个样本

吡啶核苷酸在代谢中发挥重要作用，因此，监测其浓度水平一直备受关注。 NADP?/NADPH的定量测定在涉及细胞或组织能量转换和氧化还原状态的研究中具有应用价值。简单、直接且适合自动化的NADP?/NADPH浓度测量程序非常受欢迎。BioAssay Systems的EnzyChrom? NADP?/NADPH检测试剂盒基于葡萄糖脱氢酶循环反应，其中生成的NADPH还原甲臜（MTT）试剂。在565 nm处测量的还原产物颜色强度与样本中的NADP?/NADPH浓度成正比。该检测对NADP?/NADPH具有高度特异性，且不受NAD?/NADH的干扰。我们的检测方法是一种方便测量NADP、NADPH及其比例的方法。

作为BioAssay Systems在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BioAssay Systems热销产品【干冰】EnzyChrom NADP+/NADPH检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

应用：

直接检测：细胞或组织提取物中的NADP?/NADPH浓度及其比例。

主要特点：

灵敏且准确。96孔板检测的检测限为0.1 uM，线性范围可达10 uM NADP+/NADPH。

方便。操作步骤简单，只需加入一种工作试剂，并在室温下分别于0时刻和30分钟时读取吸光度。无需37°C加热器。

高通量。可作为高通量96孔板检测方法，每天可处理数千个样本。

试剂盒组成（96孔板进行100次检测）：

检测缓冲液：10 mL

酶A：120 uL

MTT溶液：1.5 mL

酶B：120 uL

G6P：120 uL

NADP标准品：0.5 mL（1 mM）

NAD(P)/NAD(P)H提取缓冲液：各12 mL

储存条件：试剂盒在冰上运输。将所有试剂储存于-20°C。保质期：收货后6个月。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时应遵循实验室试剂的常规注意事项。请参阅材料安全数据表以获取详细信息。

检测步骤：

1. 样本准备。对于组织样本，每份称取约20 mg组织，用冰冷的PBS洗涤。对于细胞样本，用冰冷的PBS洗涤细胞，并每份收集约10?个细胞。将样本（组织或细胞）在1.5 mL离心管中用100 uL NADP提取缓冲液（用于NADP测定）或100 uL NADPH提取缓冲液（用于NADPH测定）进行匀浆。将提取物在60°C加热5分钟，然后加入20 uL检测缓冲液和100 uL另一种提取缓冲液以中和提取物。短暂涡旋振荡后，以14,000 rpm离心5分钟。使用上清液进行NADP/NADPH检测。测定NADP和NADPH浓度需要分别从两个独立样本中提取。

2. 标准曲线制备。将5 uL 1 mM标准品与495 uL蒸馏水混合，制备500 uL 10 uM NADP预混合液。将40 uL标准品分别加入透明底96孔板的各个孔中。

样本：每孔加入40 uL样本，分别置于不同的孔中。

3. 试剂准备。为获得最佳结果，建议在制备工作试剂前将酶恢复至室温（15-30分钟）。对于每个反应孔，通过混合80 uL检测缓冲液、1 uL酶A、1 uL酶B、1 uL G6P和14 uL MTT来制备工作试剂。建议现配现用。

4. 反应。每孔快速加入80 uL工作试剂。轻拍平板以短暂但充分混合。

5. 读取吸光度。在565 nm（520-600 nm）处读取0时刻的吸光度（OD?）和室温孵育30分钟后的吸光度（OD??）。

6. 计算。从标准品和样本孔的OD30中减去OD0。使用ΔOD值从标准曲线上确定样本的NADP/NADPH浓度。

注意：如果样本的ΔOD值高于10 uM标准品的ΔOD值，则用蒸馏水稀释样本并重复检测。将结果乘以稀释因子。

一般注意事项：

1. 在这些浓度下，NADP和NADPH的标准曲线是相同的。由于溶液中的NADPH不稳定，我们仅提供NADP作为标准品。

2. 该检测基于酶催化的动力学反应。加入工作试剂应迅速，混合应简短但要充分。推荐使用多通道移液器。

3. 以下物质会干扰检测，应在样本准备中避免使用：EDTA（>0.5 mM）、抗坏血酸、SDS（>0.2%）、NaN3、NP-40（>1%）和Tween-20（>1%）。

文献参考：

1. Kwak, S., et al. (2020). Redirection of the glycolytic flux enhances isoprenoid production in Saccharomyces cerevisiae. Biotechnology Journal 15(2): e1900173.

2. Zhang, Y., et al. (2021). Hepatic stellate cells specific liposomes with the Toll-like receptor 4 shRNA attenuates liver fibrosis. Journal of Cellular and Molecular Medicine 25(2): 1299-1313.

3. Hu, Li, et al (2019). Melatonin decreases M1 polarization via attenuating mitochondrial oxidative damage depending on UCP2 pathway in prorenin-treated microglia. PloS one 14.2: e0212138. 

BioAssay Systems是一家位于美国北加州湾区的高新技术生物技术公司，专注于研发、生产和销售高品质的生化检测试剂盒，产品种类齐全，主要用于科学研究和生物医药开发，以满足生命科学行业日益增长的需求。BioAssay Systems在现代药物发现领域拥有超过50年的丰富经验，已经开发了超过250种用于药物发现和生命科学研究的检测试剂盒。产品主要包括：1.血液尿液化学；2.酶活性测定；3.能量代谢；4.氧化应激；5.高通量HTS试剂；6.阴阳离子检测。

作为BioAssay Systems在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BioAssay Systems产品。