EnzyChrom NADP/NADPH检测试剂盒，简单直接可自动化的高通量检测方案

一、产品概述

吡啶核苷酸（NADP? 和 NADPH）在细胞代谢中发挥着核心作用。NADPH 作为主要的还原当量，参与脂肪酸合成、胆固醇合成、谷胱甘肽再生以及氧化应激防御等关键生物过程；而 NADP?是其氧化形式。NADP?/NADPH 的比例直接反映了细胞或组织的还原状态和能量代谢平衡，因此在代谢研究、药物筛选、毒理学评价及疾病机制探索中，准确测定 NADP? 和 NADPH 的浓度及其比值具有重要意义。

由艾美捷代理BioAssay Systems推出的EnzyChrom? NADP?/NADPH 检测试剂盒（货号：E2NP-100）提供了一种 简单、直接、可自动化 的高通量检测方案，用于细胞或组织提取物中 NADP? 和 NADPH 的定量分析。本试剂盒基于葡萄糖脱氢酶循环反应，通过比色法（565 nm）检测，可在 30 分钟内完成测定，无需 37°C 加热设备，且对 NAD?/NADH 无交叉干扰。

二、产品关键特性

特性 具体指标

应用 细胞或组织提取物中 NADP?/NADPH 浓度及比值定量

检测限 0.1 ?M

线性范围 0 – 10 ?M（96 孔板）

检测方法 比色法，OD 565 nm

操作时间 30 分钟（室温孵育，无需 37°C）

样本类型 细胞、组织

适用物种 人、小鼠、大鼠及其他物种

规格 100 次检测

保质期 6 个月

核心优势总结：

灵敏准确：检测限低至 0.1 ?M，线性范围 0–10 ?M。

便捷：单一工作液添加，分别读取初始（0 分钟）和 30 分钟时的吸光度，室温操作。

高通量：兼容 96 孔板，可轻松自动化，每日处理数千样本。

高特异性：高度特异于 NADP?/NADPH，NAD?/NADH 不干扰。

三、检测原理

本试剂盒采用 葡萄糖脱氢酶循环反应 与 四唑盐显色 偶联体系。具体原理如下：

1. 在葡萄糖脱氢酶催化下，样本中的 NADP? 或 NADPH 参与循环反应，生成的 NADPH 不断被利用。

2. 产生的 NADPH 将无色的四唑盐（MTT 类似物）还原为紫色的甲臜（formazan）产物。

3. 甲臜产物在 565 nm 波长处有特征吸收峰，吸光度增量（ΔOD = OD????? ? OD????）与样本中 NADP? 及 NADPH 的总浓度成正比。

通过同时检测 总 NADP?/NADPH（氧化+还原形式） 和 单独 NADPH（碱处理破坏 NADP? 后检测剩余 NADPH），可分别计算出：

总 NADP?/NADPH = 未经碱处理的样本测值

NADPH = 碱处理后样本测值

NADP? = 总 NADP?/NADPH ? NADPH

NADP?/NADPH 比值 = NADP? ÷ NADPH

本检测体系对 NADP? 和 NADPH 具有同等响应，且不识别 NAD?/NADH，确保了结果的特异性。

四、试剂盒组分与储存

（典型组分，以实际标签为准）

NADP?/NADPH 标准品：1 管（冻干粉，浓度见标签）

反应缓冲液：1 瓶

葡萄糖脱氢酶：1 管

四唑盐（MTT 试剂）：1 管

增强剂（可选）：1 管

碱处理液：1 瓶（用于 NADPH 单独测定）

96 孔板（可选，如未提供需自备）

储存条件：所有组分于 -20°C 避光保存。未开封试剂盒在推荐条件下稳定 6 个月。酶和显色剂应避免反复冻融，建议分装保存。

五、性能验证数据

检测限（LOD）：0.1 ?M

线性范围：0–10 ?M（R? > 0.99）

精密度：批内 CV < 5%，批间 CV < 10%

特异性：在等摩尔浓度下，NAD? 和 NADH 产生的信号低于 NADP?/NADPH 的 1%，可忽略不计。

六、应用场景举例

代谢研究：监测糖代谢（戊糖磷酸途径）、脂质合成和谷胱甘肽再生过程中 NADPH 水平的变化。

氧化应激评估：在抗氧化药物或毒物处理前后，测定细胞中 NADP?/NADPH 比值，反映还原能力的耗竭程度。

癌症代谢：肿瘤细胞通常上调 NADPH 生成以支持快速增殖和抗氧化防御，本试剂盒可用于靶向 NADPH 代谢的抗癌药物筛选。

神经科学：检测神经退行性疾病模型（如帕金森病、阿尔茨海默病）中脑组织 NADP?/NADPH 比例的变化。

毒理学：评估环境污染物（如重金属、农药）对肝细胞或肾细胞 NADPH 稳态的干扰。

七、常见问题（FAQ）

问：能否同时测定 NAD?/NADH？  

答：不能。本试剂盒对 NADP?/NADPH 具有高度特异性，NAD?/NADH 不产生显著信号。如需测定 NAD?/NADH，请使用专门的 NAD?/NADH 检测试剂盒。

问：是否需要 37°C 孵育？  

答：不需要。本试剂盒所有反应均在室温（20–25°C）下进行，孵育 30 分钟即可。这简化了设备要求，尤其适合高通量筛选。

问：如何处理浓度高于 10 ?M 的样本？  

答：用反应缓冲液或去离子水进行 2–10 倍稀释，使稀释后样本浓度进入标准曲线范围，计算结果时乘以稀释倍数。

问：碱处理法区分 NADP? 和 NADPH 的原理是什么？  

答：NADP? 在碱性条件下（pH > 12）迅速降解（半衰期约 20 分钟），而 NADPH 在碱性条件下相对稳定。通过碱处理孵育 10–15 分钟，可完全消除 NADP? 信号，剩余信号即为 NADPH 的真实浓度。

问：能否用于血清、血浆样本？  

答：本试剂盒主要针对细胞和组织提取物设计。血清/血浆中 NADP?/NADPH 浓度极低（通常在纳摩尔水平），且存在大量干扰物质，不建议直接使用。如需检测体液样本，建议使用专门的 NADP?/NADPH 荧光法试剂盒。