牛IgG ELISA试剂盒，初乳、血清、牛奶多样本适用

产品概述

牛IgG ELISA试剂盒（货号：E11-118）由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款用于定量检测牛源样本中免疫球蛋白G（IgG）浓度的夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒。采用预包被抗牛IgG抗体的96孔板、生物素标记的检测抗体及链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶）放大系统，可对血清、血浆、初乳和牛奶等样本中的IgG进行高灵敏度定量。检测范围为0.69–500 ng/ml，适用于牛免疫状态评估、初乳质量监控、乳制品检测及兽医学研究等领域。

技术参数

参数 | 详细信息

靶点 | 牛IgG

反应种属 | 牛

应用 | ELISA

检测范围 | 0.69 – 500 ng/ml

样本类型 | 血清、血浆、初乳、牛奶

检测方法 | 生物素标记链霉亲和素-HRP（夹心法）

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 收货之日起6个月

试剂盒组分

组分 | 规格 | 数量

牛IgG预包被96孔板 | 96孔（8×12） | 1块

牛IgG标准品 | 500 ng/管 | 2管

牛IgG检测抗体 | 12 ml | 1瓶

20×稀释缓冲液C | 25 ml | 1瓶

HRP溶液C | 12 ml | 1瓶

TMB底物液 | 12 ml | 1瓶

终止液 | 12 ml | 1瓶

20×洗涤缓冲液 | 50 ml | 1瓶

封板膜 | — | 6张

注：所有组分均在2–8°C条件下供应，使用前需平衡至室温（18–25°C）。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，具体步骤如下：

1. 包被：96孔板已预先包被抗牛IgG捕获抗体。

2. 加样：将牛IgG标准品或稀释后的待测样本加入孔中，样本中的牛IgG与固相捕获抗体结合。

3. 检测：洗板后加入生物素标记的抗牛IgG检测抗体，与已捕获的IgG形成“捕获抗体–IgG–检测抗体”夹心复合物。

4. 信号放大：加入链霉亲和素-HRP（HRP溶液C），通过生物素-链霉亲和素高亲和力结合将HRP偶联至复合物上。

5. 显色：加入TMB底物，HRP催化底物产生蓝色产物。加入终止液后颜色由蓝变黄，在450 nm波长处测定吸光度。

6. 定量：样本中的IgG浓度与显色强度呈正相关，通过标准曲线计算各样本的精确浓度。

样本类型与处理

血清与血浆

采用无菌技术采集血液，避免溶血。血清样本需在凝血后30分钟内离心分离；血浆样本可使用EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝。

样本可在2–8°C储存不超过24小时，长期保存需分装冻存于-20°C或-80°C，避免反复冻融。

检测前用1×稀释缓冲液C进行适当稀释（建议预实验确定最佳稀释倍数，通常在1:1000–1:100,000范围内）。

初乳与牛奶

初乳和牛奶样本需脱脂处理（4°C，2000×g离心10分钟，取澄清中间层）。

由于IgG含量极高（初乳中可达50 mg/ml以上），需进行大倍数稀释（如1:100,000–1:1,000,000）。建议使用试剂盒提供的稀释缓冲液C进行梯度稀释。

稀释后的样本应在4小时内完成检测。

实验步骤概要

1. 试剂准备：将20×洗涤缓冲液、20×稀释缓冲液C用去离子水稀释至1×工作液。所有组分平衡至室温。

2. 标准品制备：取1管标准品（500 ng），加入适当体积的1×稀释缓冲液C溶解，按试剂盒说明书进行倍比稀释，制备至少7个浓度点的标准曲线（建议范围：0.69–500 ng/ml）。设置空白孔（仅稀释缓冲液）。

3. 加样与孵育：每孔加入100 ?l标准品或稀释后的样本，用封板膜覆盖，室温孵育2小时（或按说明书优化条件）。

4. 洗涤：弃去孔内液体，每孔加入300 ?l 1×洗涤缓冲液，洗涤3–5次，最后一次在吸水纸上拍干。

5. 加检测抗体：每孔加入100 ?l牛IgG检测抗体（已预配成工作液），封板，室温孵育1小时。重复洗涤步骤。

6. 加HRP溶液：每孔加入100 ?l HRP溶液C，室温避光孵育30分钟。重复洗涤步骤。

7. 显色：每孔加入100 ?l TMB底物，室温避光孵育15–20分钟。观察颜色变化（标准品高浓度孔应呈现明显蓝色）。

8. 终止：每孔加入100 ?l终止液，轻轻混匀，液体由蓝变黄。

9. 读取：30分钟内使用酶标仪在450 nm波长处读取吸光度（OD值）。若使用630 nm作为参比波长，可减去背景。

注意事项

1. 避免交叉污染：使用一次性吸头，标准品和样本按顺序加样，不同浓度标准品不要混用吸头。

2. 洗涤充分：洗涤残留的未结合抗体和HRP是降低背景的关键。推荐使用自动洗板机；若手洗，每孔加满洗涤液后浸泡30秒，重复5次。

3. 显色时间控制：TMB显色时间根据环境温度调整。若室温较低，可适当延长至25分钟；反之若室温较高（>25°C），可缩短至10–15分钟。出现最高浓度标准孔变为深蓝色、次高浓度孔明显蓝色时即可终止。

4. 避免气泡：加样和加底物时避免产生气泡，否则会影响OD值读数。

5. 样本稀释确定：由于血清、初乳等样本中IgG含量差异极大，初次检测建议进行预实验，分别测试1:1,000、1:10,000、1:100,000等稀释倍数，确保样本OD值落在标准曲线中间范围内（0.3–1.8）。

储存与稳定性

整个试剂盒应储存于2–8°C，切勿冷冻。冷冻会导致包被抗体脱落和酶活性丧失。

未使用的预包被板条应放回铝箔袋中密封，在2–8°C干燥条件下保存，建议在开封后1个月内使用完毕。

所有工作液（稀释后洗涤缓冲液、稀释缓冲液）建议现配现用，剩余工作液不宜再次冷冻保存。

典型应用场景

1. 初乳质量评估：犊牛被动免疫转移依赖于初乳中IgG的摄入量。通过检测初乳中IgG浓度（通常要求>50 mg/ml），评估初乳质量，指导牧场管理。

2. 牛群免疫状态监测：定期检测牛血清中IgG水平，评估疫苗免疫应答效果或感染后的体液免疫状态。

3. 乳制品加工监控：检测原料乳、巴氏杀菌乳或奶粉中的IgG含量，作为热加工参数和质量指标。

4. 科研实验：研究牛奶中IgG的稳定性、不同饲养条件下牛免疫球蛋白的变化规律等。

*本产品仅供研究使用，不用于诊断程序。