兔抗BMAL1抗体亲和纯化，效价稳定，适用于组织与细胞裂解液研究

产品概述

兔抗BMAL1抗体亲和纯化是一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人、小鼠源BMAL1（脑和肌肉ARNT样蛋白1）的高浓度兔多克隆抗体（货号：A302-616A）。该抗体经抗原亲和纯化，以完整IgG形式提供，浓度高达1000 ?g/ml，适用于免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB），是研究昼夜节律核心调控机制的理想工具。

技术参数

参数 | 详细信息

靶点 | BMAL1（ARNTL，芳香烃受体核转位蛋白样1）

反应种属 | 小鼠、人

应用 | IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原区域 | 第576位与C末端之间（C端区域）

亚型 | IgG

标记 | 非偶联

纯化方式 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

储存与稳定性

储存条件：2–8°C，切勿冷冻。冷冻会导致抗体聚集和活性丧失。

有效期：自收货之日起1年，在未受污染且按推荐条件储存的情况下。

缓冲液组分：Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液（pH 7–8），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

注意事项：叠氮化钠可能抑制过氧化物酶活性。在IP-WB检测中，若使用HRP标记的二抗，由于后续洗涤步骤充分，影响可忽略；但若需对本抗体进行直接标记，请预先通过透析去除。

应用与方法参数

推荐工作条件

应用 | 推荐稀释度/用量 | 特殊说明

免疫沉淀（IP） | 6 ?g/mg 裂解液 | 每毫克细胞/组织裂解蛋白使用6 ?g抗体

免疫印迹（WB） | 1:2000 – 1:10,000 | 过夜孵育，5%牛奶-TBST封闭

免疫印迹（WB）详细方案

1. 封闭与抗体稀释液：5%脱脂牛奶-TBST（Tris缓冲盐溶液 + 0.1% Tween-20）

2. 一抗孵育：推荐4°C摇床过夜（约16小时）

3. 细胞裂解液WB检测：使用山羊抗兔IgG重轻链抗体（A120-101P）作为二抗

4. 免疫沉淀物WB检测：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景

注意：BMAL1的分子量约为68–75 kDa（取决于物种和翻译后修饰）。WB推荐起始稀释度为1:2000，若信号过强或出现非特异条带，可提高至1:5000–1:10,000。建议使用阳性对照（如小鼠SCN组织裂解液、人HEK293细胞裂解液）和阴性对照（非免疫兔IgG）。

免疫沉淀（IP）详细方案

用量：每毫克细胞裂解蛋白使用6 ?g本抗体。

对照设置：使用相同浓度的兔同型对照IgG（非免疫血清）作为阴性对照。

裂解液要求：推荐使用非变性裂解缓冲液（如含蛋白酶抑制剂的RIPA或NP-40裂解液）以维持BMAL1与CLOCK等蛋白的相互作用。

二抗选择：IP后WB检测时，务必使用抗兔IgG轻链特异性二抗（如HRP标记的抗兔轻链抗体），以避免与IP抗体的重链（~55 kDa）产生交叉反应。BMAL1分子量约为70 kDa，轻链二抗可以避免IP抗体重链（50 kDa）对目标区域的干扰。

临床与生理意义

代谢调控：BMAL1敲除小鼠出现葡萄糖不耐受、脂肪肝和早衰表型。

睡眠障碍：人类BMAL1基因变异与家族性睡眠相位延迟综合征（FASPS）等节律紊乱相关。

肿瘤相关性：BMAL1在多种肿瘤中表达下调，与乳腺癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤的进展和预后相关。

别名

ARNT样蛋白1，脑和肌肉

bHLH-PAS蛋白MOP3（member of PAS protein 3）

bHLHe5（basic helix-loop-helix family member e5）

JAP3

PASD3（PAS domain-containing protein 3）

MOP3

睾丸组织精子结合蛋白Li 50e

典型应用场景

1. 昼夜节律表达谱分析：在昼夜时间生物学实验中，收集不同时间点（ZT时间）的小鼠组织（如SCN、肝脏），通过WB检测BMAL1蛋白的节律性表达波动。

2. 蛋白相互作用研究：利用本抗体进行免疫共沉淀（co-IP），结合WB或质谱鉴定BMAL1与CLOCK、CRY1/CRY2、PER1/2等相互作用的动态变化。

3. 翻译后修饰分析：在磷酸酶或蛋白酶体抑制剂处理条件下，通过IP富集BMAL1，再用磷酸化特异性抗体或泛素抗体检测其修饰状态。

4. 基因敲低/过表达验证：在BMAL1 shRNA或CRISPR敲低细胞系中，使用本抗体验证敲低效率；在过表达BMAL1的细胞中确认外源蛋白表达。

5. 组织特异性表达分析：检测不同小鼠组织（脑、肌肉、肝脏、脂肪、心脏等）中BMAL1的表达水平，研究外周节律器官的差异。

实验注意事项

物种交叉反应性：已验证人与小鼠；大鼠、猴等其他物种需自行测试。

WB稀释度：由于抗体浓度高（1 mg/ml），初次实验建议从1:2000开始。若在70 kDa处背景较高，可提高至1:5000或1:10,000。

IP-WB的轻链干扰：BMAL1分子量约70 kDa，IP抗体的重链（~55 kDa）可能与之接近。务必使用抗兔轻链特异性二抗或在WB中使用高分辨率凝胶延长分离距离，必要时可考虑使用交联的抗体IP方法。

蛋白降解敏感性：BMAL1在细胞裂解后容易降解，建议使用新鲜制备的裂解液并添加广谱蛋白酶抑制剂（如PMSF、cocktail）。

核蛋白制备：BMAL1主要定位于细胞核，进行IP或WB前建议提取核蛋白或使用强去垢剂（如RIPA）裂解。

叠氮化钠影响：若进行细胞培养（如添加抗体至培养基）或体内注射实验，需通过透析去除。

总结

A302-616A兔抗BMAL1抗体凭借其1000 ?g/ml的高浓度、C端特异性表位设计以及IP/WB双平台验证，是研究昼夜节律调控机制、生物钟相关代谢疾病和肿瘤发生的可靠工具。优化的WB稀释范围（1:2000–1:10,000）和明确的IP用量（6 ?g/mg裂解液）适用于从小鼠组织到人细胞系的多类型样本。结合轻链特异性二抗的使用，可有效避免IP实验中重链信号的干扰，获得清晰、可信的检测结果。

*本产品仅供研究使用，不用于诊断程序。