山羊抗V5标签抗体亲和纯化：WB/IP/ICC/ELISA四平台验证，多功能抗V5标签抗体

产品概述

V5标签抗体是一种用于检测和纯化V5表位标记重组蛋白的高亲和力工具。本产品为山羊来源的多克隆抗体（货号：S190-119），由艾美捷Bethyl Laboratories推出，经抗原亲和纯化，以完整IgG形式提供，浓度为1 mg/ml。该抗体识别人工合成的V5标签肽段（GKPIPNPLLGLDST），适用于酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）等多种应用场景。

技术参数

参数 | 详细信息

靶点 | V5标签

应用 | ELISA、ICC、IP、WB

宿主 | 山羊

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

亚型 | IgG

标记 | 非偶联

纯化方式 | 抗原亲和纯化

浓度 | 1 mg/ml |

储存温度 | 2 – 8 °C

有效期 | 收货之日起1年

缓冲液 | 磷酸盐缓冲液（PBS），含0.09%叠氮化钠

储存与稳定性

储存条件：2–8°C，切勿冷冻。冷冻会导致抗体聚集和活性丧失。

有效期：自收货之日起1年，在未受污染且按推荐条件储存的情况下。

缓冲液组分：磷酸盐缓冲液（PBS），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

注意事项：叠氮化钠可能抑制过氧化物酶活性。若需将本抗体酶标记或用于细胞培养实验，请预先通过透析或超滤去除叠氮化钠。

应用与方法参数

注意：并非所有列出的应用均经过生产实验室的直接测试。以下稀释范围为文献参考值，用户需根据具体实验体系进行优化。

推荐工作条件

应用 | 推荐稀释度/用量 | 备注

ELISA（检测抗体） | 1:1000 – 1:30,000 | 作为一抗检测V5标签蛋白

ELISA（包被用） | 1:100 – 1:500 | 将抗体直接包被于微孔板捕获V5标签蛋白

免疫细胞化学（ICC） | 1:100 – 1:400 | 适用于细胞爬片或培养细胞的免疫荧光/染色

免疫沉淀（IP） | 1 – 4 ?g/mg 裂解液 | 每毫克细胞裂解蛋白使用1–4 ?g抗体

免疫印迹（WB） | 1:1000 – 1:30,000 | 过夜孵育，5%牛奶-TBST封闭

免疫印迹（WB）详细方案

1. 封闭与抗体稀释液：5%脱脂牛奶-TBST（Tris缓冲盐溶液 + 0.1% Tween-20）。

2. 一抗孵育：推荐4°C摇床过夜（约16小时），稀释度从1:5000开始摸索。

3. 二抗：使用驴抗山羊IgG重轻链抗体（货号A50-101P）。由于本抗体来源于山羊，不可使用抗兔或抗小鼠二抗。

4. 检测：根据二抗的标记（HRP、荧光等）进行化学发光或荧光成像。

优化建议：由于本抗体为多克隆抗体，WB中可能出现非特异条带。可通过提高稀释度（如1:10,000–1:30,000）或增加洗涤次数降低背景。转膜后使用丽春红染色确认蛋白上样量。

免疫沉淀（IP）详细方案

用量范围：每毫克细胞裂解蛋白使用1–4 ?g本抗体。对于高表达的重组蛋白，可选用1–2 ?g/mg；对内源性表达水平极低的蛋白，建议使用3–4 ?g/mg。

对照设置：使用相同物种和亚型的非免疫山羊IgG作为阴性对照。

裂解液选择：推荐使用非变性裂解缓冲液（如含蛋白酶抑制剂的NP-40或RIPA裂解液，离子强度适中），以维持标签蛋白的天然构象和相互作用。

二抗选择：IP后WB检测时，若使用抗山羊IgG重轻链二抗，会检测到IP抗体的重链（~55 kDa）和轻链（~25 kDa）。为避免干扰，可改用抗V5标签的直接标记二抗，或使用Protein A/G磁珠进行IP时选择交联抗体的策略。

免疫细胞化学（ICC）详细方案

样本准备：细胞爬片或多孔板中培养的细胞，经4%多聚甲醛固定15–20分钟，0.2% Triton X-100透化（若检测细胞内蛋白）。

封闭：使用5%正常驴血清或1% BSA-PBS封闭30–60分钟。

一抗孵育：1:100–1:400稀释本抗体，室温孵育1–2小时或4°C过夜。

二抗：使用荧光标记的抗山羊IgG（如Alexa Fluor 488/555/647标记的驴抗山羊IgG），避免使用与固定剂产生自发荧光通道重叠的染料。

复染与封片：使用DAPI或Hoechst染色细胞核，封片后荧光显微镜观察。

ELISA详细方案

作为检测抗体：将V5标签蛋白直接或通过捕获抗体包被于ELISA板，封闭后加入1:1000–1:30,000稀释的本抗体，孵育1小时，洗涤后加入HRP标记的抗山羊IgG二抗，TMB显色。

作为包被抗体：使用1:100–1:500稀释的本抗体包被ELISA板（4°C过夜或37°C 2小时），封闭后加入含有V5标签蛋白的样本，再使用酶标记的标签特异性二抗或直接标记的检测抗体进行检测。

实验注意事项

物种交叉反应：本抗体为山羊抗V5，如果实验样本本身含有内源性山羊IgG（如使用山羊血清封闭），可能会产生背景。建议使用驴抗山羊二抗或选择合适的封闭血清（如正常驴血清）。

二抗匹配：检测时务必使用抗山羊IgG的二抗，不可使用抗兔或抗小鼠的二抗。

多克隆背景控制：由于是多克隆抗体，WB中可能出现非特异性条带，建议设置空载体转染或未转染细胞裂解液对照，以区分特异信号。也可通过提高稀释度（1:10,000以上）降低背景。

抗原表位可及性：若V5标签位于融合蛋白的C端且被高级结构遮蔽，可能影响抗体结合。此时可尝试在变性条件下（如WB、IP前煮沸样品）或使用更强去垢剂的裂解液处理。

叠氮化钠去除：若需交联抗体至琼脂糖珠用于IP，叠氮化钠会抑制交联反应，请预先通过透析去除。

*本产品仅供研究使用，不用于诊断程序。