ELISA入门配件试剂盒（含BSA封闭缓冲液），自带BSA封闭液，一站式配齐省时间

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本ELISA入门配件试剂盒（含BSA封闭缓冲液）（货号：E101）为酶联免疫吸附测定实验提供全套基础试剂与耗材，包含高质量微孔板、包被缓冲液、洗涤液、封闭液、表面活性剂及HRP酶底物。所有组件均经过优化设计，适用于建立或优化间接ELISA、夹心ELISA及竞争ELISA等多种检测体系。本套装覆盖ELISA实验从抗原包被到信号检测的全流程，用户仅需准备待测样本、一抗及酶标二抗即可开展实验。

二、组件清单与详细规格

组件名称 | 规格 | 货号/来源 | 存储条件 | 保质期

微孔板（带框架） | 10 × 96孔板 | Nunc 445101 | 室温，防尘防潮 | 1年

ELISA包被缓冲液 | 2胶囊 | Sigma C3041 | 室温 | 1年

ELISA洗涤液 | 5包 | Sigma T9039 | 2-30°C | 1年

ELISA封闭缓冲液 | 1包 | Sigma T6789 | 2-8°C | 1年

10% Tween 20 | 1瓶 | Sigma P7949 | 室温 | 1年 |

TMB底物液 | 2 × 60 ml | — | 2-8°C | 1年

三、各组件的功能与使用说明

3.1 微孔板（Microtiter Wells）

产品信息：Nunc MaxiSorp C形底模块与框架，货号445101，共10块96孔板。MaxiSorp表面经专有处理，具有高亲水性及高蛋白结合能力，适用于被动吸附抗原或抗体。

使用要点：

C形底（平底）设计便于比色读数，尤其适合酶标仪检测。

每孔结合容量约为400-500 ng IgG（取决于蛋白性质）。

拆开包装后未使用的板条应密封保存，避免吸湿。

建议在包被前用无水乙醇或异丙醇清洁表面（非必需步骤）。

存储条件：室温存放，避免灰尘和碎屑污染。请勿暴露于高温或潮湿环境。

3.2 ELISA包被缓冲液（Coating Buffer）

产品信息：碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液胶囊（Sigma C3041），每包2粒。每粒胶囊配制100 ml缓冲液，终浓度为0.05 M碳酸盐-碳酸氢盐，pH 9.6。该pH范围适用于多数蛋白质（如抗体、抗原）的被动吸附。

配制方法：将一粒胶囊内容物溶于100 ml去离子水或蒸馏水中，搅拌至完全溶解。无需调节pH。

使用提示：

包被条件：推荐每孔加入50-100 ?l稀释于包被缓冲液中的抗原或抗体，4°C孵育过夜或37°C孵育1-2小时。

包被后需用洗涤液洗板3-5次，再进行封闭步骤。

未使用完的包被液可短期保存于2-8°C（建议1周内使用），但推荐新鲜配制。

3.3 ELISA洗涤液（Wash Solution）

产品信息：50 mM Tris缓冲盐水，pH 8.0，含0.05% Tween 20（Sigma T9039），每包可配制1升工作液。Tris缓冲体系提供稳定的pH环境，Tween 20作为非离子型表面活性剂可有效降低非特异性吸附。

配制方法：将一包内容物溶于900 ml去离子水，搅拌溶解后定容至1升。无需调节pH。

存储条件：配制后的工作液可在2-30°C保存一年，但建议室温（20-25°C）存放以避免低温沉淀。

使用提示：

每孔洗涤量推荐300 ?l，每次洗涤静置30-60秒后拍干。

重复洗涤3-5次可有效去除未结合物质。

若发现洗涤液有沉淀，可轻微加热（不超过37°C）溶解后使用。

3.4 ELISA封闭缓冲液（Blocking Buffer）

产品信息：50 mM Tris缓冲盐水，pH 8.0，含1%牛血清白蛋白（BSA）（Sigma T6789），每包配制100 ml工作液。BSA可封闭微孔板上未被包被蛋白占据的空白位点，减少后续抗体的非特异性吸附。

配制方法：将一包内容物溶于90 ml去离子水，搅拌溶解后定容至100 ml。可轻微加热（37°C）辅助溶解。建议无菌过滤（0.22 ?m滤膜）后使用。

存储条件：配制后应保存于2-8°C，保质期一年。请勿反复室温放置。

使用提示：

每孔加入200-300 ?l封闭液，室温孵育1小时或4°C过夜。

封闭后无需洗涤，直接加入一抗或检测抗体。

若检测系统对BSA敏感（如某些抗BSA抗体），可改用脱脂牛奶或其他封闭剂。

3.5 10% Tween 20溶液

产品信息：10%聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯（Tween 20）水溶液（Sigma P7949）。Tween 20是ELISA洗涤缓冲液中的关键去污剂，可降低背景信号。

使用提示：

用于配制含Tween 20的洗涤缓冲液或抗体稀释液。常见工作浓度为0.05%（即每升缓冲液加入5 ml 10% Tween 20）。

也可直接加入样本稀释液中，减少非特异性吸附。

原液若出现絮状物或沉淀，可轻微加热（不超过40°C）并摇匀后使用。

存储条件：室温保存，避免冻结。有效期一年。

3.6 TMB酶底物（Enzyme Substrate）

产品信息：TMB（四甲基联苯胺）单组分HRP微孔底物液，共2瓶，每瓶60 ml。即开即用，无需稀释或混合。TMB在辣根过氧化物酶（HRP）催化下产生蓝色可溶性产物（λmax = 370 nm或652 nm），加酸终止后变黄（λmax = 450 nm），是最常用的HRP显色底物之一。

使用提示：

使用前将底物平衡至室温（避免冷底物导致反应速率不均）。

每孔加入50-100 ?l底物，室温避光孵育5-30分钟（根据信号强度优化时间）。

显色充分后，每孔加入50 ?l终止液（如2 M H?SO?或1 M HCl），轻轻混匀后读取OD 450 nm。

请勿使用金属器具接触底物，避免氧化污染。

存储条件：严格保存于2-8°C，避免光照。未开封可保存一年，开封后建议在1个月内用完，或分装后冷冻保存（-20°C）。若底物出现蓝色或深蓝色，表明已氧化失效，请勿使用。

四、注意事项与质量控制

1. 交叉污染预防：各组件应独立存放，使用洁净移液器及吸头。Tween 20易起泡，加液时避免产生过多气泡。

2. 内源性酶干扰：若样本中含有内源性过氧化物酶（如血液样本），可在样本稀释液中加入0.1%叠氮化钠或0.01%过氧化氢酶抑制剂，但需注意叠氮化钠会抑制HRP，不可在底物反应前使用。

3. 底物安全：TMB潜在致癌性，操作时应戴手套，避免皮肤接触。

4. 板子保存：包被封闭后的微孔板可干燥密封保存于2-8°C 1-2周，但建议新鲜使用以获得最佳灵敏度。

5. 缓冲液pH：包被缓冲液pH 9.6适用于大多数蛋白，若蛋白等电点极低（pI <5），可改用中性或弱酸性包被缓冲液（如PBS，pH 7.4）。