兔抗BubR1抗体亲和纯化，高纯度助力科研攻坚

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为针对BubR1（BUB1B，纺锤体检查点丝氨酸/苏氨酸激酶B）的兔源多克隆抗体（货号：A300-386A），经抗原亲和纯化，适用于免疫沉淀（IP）及Western Blot（WB）检测。BubR1是细胞周期纺锤体检查点（spindle checkpoint）的核心组分，与Bub3、Mad2、Cdc20共同构成有丝分裂检查点复合物（MCC），通过抑制后期促进复合物（APC）确保染色体在赤道板正确排列前不发生分离。BubR1功能异常与染色体不稳定、非整倍体及多种肿瘤发生密切相关。

二、关键规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | BubR1（BUB1B / MAD3L）

反应性 | 大鼠、小鼠、人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 人BubR1蛋白第350至400位氨基酸之间的区域

亚型 | IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化

浓度 | 1000 ?g/ml

存储条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与特异性识别

本抗体识别的表位位于人BubR1蛋白第350至400位氨基酸残基之间（参考TrEMBL条目Q8WV50，GeneID 701）。该区域位于BubR1的中间区域，避开了N端的激酶结构域和C端的PP2A结合区域，可特异性识别全长BubR1及其天然构象。

抗体通过固相载体上固定的BubR1特异性表位进行亲和纯化，确保高特异性和低背景。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

种属交叉反应性：已验证反应性包括人、小鼠、大鼠，适用于三个物种的细胞周期研究。经测试，该抗体在人HEK293、HeLa、小鼠NIH/3T3及大鼠NRK细胞裂解液中均可检测到预期大小的BubR1条带（约120 kDa）。

四、应用方法与推荐条件

4.1 Western Blot（WB）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:2000 - 1:15,000

封闭/稀释液 | 5% 脱脂牛奶-TBST

一抗孵育 | 过夜孵育

二抗（细胞裂解液WB） | 山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

操作提示：

BubR1在细胞周期中表达水平随细胞周期进程波动，在G2/M期达到高峰。建议使用同步化至M期的细胞裂解液（如秋水仙胺或诺考达唑处理）作为阳性对照。

推荐起始稀释度为1:2000。若信号过强，可上调至1:5000-1:15000。

预期条带位置：约120 kDa。有时可观察到较低分子量的降解条带（常见于凋亡或老化细胞），属于正常现象。

全细胞裂解液制备时建议添加蛋白酶抑制剂（如PMSF、蛋白酶抑制剂cocktail），防止BubR1降解。

4.2 免疫沉淀（IP）

参数 | 条件

推荐用量 | 6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解蛋白

操作提示：

该用量适用于人、小鼠或大鼠细胞裂解液（总蛋白浓度1-10 mg/ml）。建议使用非变性裂解缓冲液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 8.0）以保持蛋白复合物完整性。

免疫沉淀后，对沉淀复合物进行WB检测时，必须使用抗兔IgG轻链HRP结合抗体（而非常规抗兔IgG H+L），以避免IP抗体的重链信号（约50 kDa）干扰目标蛋白检测。同时，在封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）可进一步降低非特异性背景。

建议设置同型对照兔IgG作为阴性IP对照，以排除非特异性结合。

4.3 IP-WB联用检测流程

对于分析BubR1与其相互作用蛋白（如Bub3、Mad2、Cdc20）的共免疫沉淀实验，推荐以下步骤：

1. 裂解细胞（每mg总蛋白使用6 ?g抗体进行IP）。

2. 孵育后加入蛋白A/G磁珠或琼脂糖珠，4°C旋转孵育2小时或过夜。

3. 洗涤珠子3-5次后，加入SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸变性。

4. 进行WB检测时，一抗仍使用本抗体（A300-386A），二抗选择抗兔IgG轻链HRP，避免重链信号（约50 kDa）遮挡目标区域。

五、存储与稳定性

存储温度：2 - 8°C，请勿冷冻。高浓度（1000 ?g/ml）配方在冷藏条件下极为稳定。反复开盖取用建议分装保存，避免污染。

保质期：收货后1年内保持完整活性。

防腐剂：含0.09%叠氮化钠，可抑制微生物污染。若下游应用涉及HRP检测（如WB中直接使用HRP二抗），叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，需通过透析或脱盐柱去除。对于IP实验，叠氮化钠通常不影响抗体与蛋白A/G的结合，但若担心干扰，也可在裂解液中不添加额外叠氮化物。

缓冲液体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），兼容多数免疫检测体系。

本产品适用于细胞周期调控、有丝分裂检查点、染色体稳定性及肿瘤生物学等相关研究领域。