兔抗生物素抗体亲和纯化，高特异性结合，低背景无交叉干扰

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品（货号：A150-109A）为针对生物素（Biotin，维生素B7）的兔源多克隆抗体（Whole IgG格式），经抗原亲和纯化，适用于酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫组化（IHC）及Western Blot（WB）检测。生物素是哺乳动物代谢中重要的辅酶，在分子生物学领域更被广泛用作标记分子，通过其与链霉亲和素的强亲和力实现信号放大或目标捕获。本抗体可特异性识别生物素标记的蛋白或核酸，是检测生物素化探针、评估标记效率及定位生物素化分子的理想工具。

二、关键规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | 生物素（Biotin，维生素B7）

反应性 | 不适用（针对小分子半抗原）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

格式 | Whole IgG

亚型 | IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化（生物素-琼脂糖凝胶）

浓度 | 1 mg/ml |

存储条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后2年

缓冲液 | 磷酸盐缓冲液（PBS），含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与特异性

3.1 生产流程

本抗体通过使用生物素偶联的琼脂糖凝胶进行亲和层析分离纯化。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

3.2 特异性验证

经免疫电泳和ELISA验证，本抗体与以下抗原特异性反应：

KLH-生物素（钥孔血蓝蛋白-生物素偶联物）

BSA-生物素（牛血清白蛋白-生物素偶联物）

无交叉反应：与游离KLH或游离BSA均无反应。

该特异性验证表明，抗体识别的是生物素分子本身，而非载体蛋白。因此，本抗体可广泛用于检测任何生物素化分子（蛋白、核酸、多糖等），无需考虑载体蛋白类型。

3.3 适用性说明

由于生物素为小分子半抗原，通常需要偶联至载体蛋白才能有效免疫动物。本抗体经亲和纯化后，已去除抗载体蛋白的抗体成分，确保对生物素表位的高特异性识别。

四、应用方法与推荐条件

重要提示：并非所有列出的应用均已由我们的实验室进行过具体验证。以下提供的稀释范围为基于文献及客户反馈的参考起始条件，建议用户在初次使用时进行梯度优化。

4.1 酶联免疫吸附测定（ELISA）

参数 | 推荐条件

检测稀释比 | 1:1000 - 1:30,000

包板稀释比 | 1:100 - 1:500（用于包被生物素化抗原）

操作提示：

作为检测抗体时，建议从1:5000起始进行倍比稀释，选择信噪比最高的稀释度。

用于包被ELISA板时（如固定生物素化BSA），1:100-1:500的稀释度可提供足够的包被密度。

推荐使用含0.05% Tween-20的PBS作为洗涤缓冲液，含1% BSA的PBS作为封闭液和抗体稀释液。

4.2 免疫细胞化学（ICC）

参数 | 推荐条件

稀释比例 | 1:200 - 1:2000

操作提示：

用于检测细胞表面或胞内生物素化蛋白。若检测胞内靶标，需进行固定和透化处理（推荐4%甲醛固定，0.1% Triton X-100透化）。

建议从1:500起始，根据信号强度调整稀释度。

应设置未生物素化样本作为阴性对照，以排除内源性生物素干扰（某些细胞类型含内源性生物素，可预先用亲和素封闭试剂处理）。

4.3 免疫组化（IHC）

参数 | 推荐条件

稀释比例 | 1:200 - 1:2000

样本类型 | 福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片或冰冻切片

操作提示：

对于FFPE切片，推荐使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）或EDTA缓冲液（pH 8.0）进行热诱导抗原修复。

内源性生物素在某些组织（如肝脏、肾脏）中丰度较高，建议使用亲和素/生物素封闭试剂盒预处理切片，以消除非特异性染色。

推荐起始稀释度为1:500，根据背景和信号强度向上或向下调整。

4.4 Western Blot（WB）

参数 | 推荐条件

稀释比例 | 1:1000 - 1:30,000

封闭/稀释液 | 5% 脱脂牛奶-TBST 或 3% BSA-TBST

操作提示：

本抗体可用于检测转印膜上生物素化蛋白（如生物素标记的抗体、生物素化细胞裂解液中的蛋白）。

推荐起始稀释度为1:5000，宽范围（1:1000-1:30,000）允许根据不同样本丰度灵活调整。

必须设置未生物素化的同批次蛋白样本作为阴性对照，以评估背景。

若检测内源性生物素化羧化酶（如乙酰辅酶A羧化酶，分子量约265 kDa），信号可能较强，建议使用更高稀释度（如1:20,000-1:30,000）。

二抗选择：使用HRP或荧光标记的抗兔二抗进行检测。二抗稀释度参照供应商推荐。

五、生物学功能

代谢辅酶：生物素是五种羧化酶（乙酰辅酶A羧化酶、丙酰辅酶A羧化酶、丙酮酸羧化酶、甲基巴豆酰辅酶A羧化酶、甲基丙二酰辅酶A羧化酶）的必需辅因子，参与脂肪酸合成、糖异生和氨基酸代谢。

基因表达调控：通过组蛋白生物素化修饰参与染色质重塑和基因转录调控。

分子生物学应用：

标记与捕获：生物素可与链霉亲和素/亲和素形成极高亲和力（Kd ~10??? M）的非共价结合，是分子生物学中最常用的亲和标记系统。

生物素化探针：抗体、核酸、小分子均可通过化学偶联引入生物素标签，用于ELISA、Western Blot、免疫组化、Pull-down、流式细胞术等检测。

信号放大：基于生物素-链霉亲和素系统的检测灵敏度远高于直接标记法。

六、存储与稳定性

存储温度：2 - 8°C，请勿冷冻。冷冻可能导致抗体聚集或活性下降。

保质期：收货后2年内保持稳定，优于多数抗体的1年保质期。

防腐剂：含0.09%叠氮化钠，可抑制微生物污染。若下游应用涉及HRP检测，需注意叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，可通过透析或脱盐柱去除。

缓冲液体系：磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.2-7.4），兼容绝大多数免疫检测体系。避免反复开盖，建议分装后长期保存（2-8°C）。