QA-Bio-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶使用方法建议

N-乙酰氨基葡萄糖苷酶能够从复杂碳水化合物和糖蛋白中切割所有非还原末端β连接的N-乙酰氨基葡萄糖残基。

在二、三和四天线寡糖上，GlcNAc的不同连接的切割速率在很大程度上取决于邻近残基的空间阻碍。与β(1-3)连接的甘露糖相连的β(1-2)GlcNAc残基的切割速率最高，而与β(1-6)连接的甘露糖相连的β(1-2)GlcNAc残基的切割速率最低。当存在β(1-6)GlcNAc残基时，其以第二高的速率被移除，而β(1-4)GlcNAc则以第三高的速率被移除。在三天线结构上，这个残基以第二高的速率被移除。双分叉的β(1-4)GlcNAc连接到β连接的甘露糖严重阻碍了其他GlcNAc残基的切割——需要高浓度的酶和长时间的孵化才能进行切割。

艾美捷QA-Bio-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶：

货号：E-GL01

来源：于在大肠杆菌中重组表达的肺炎链球菌。

EC： 3.2.1.52

内容物：20 mM Tris-HCl，25 mM NaCl，pH 7.5中的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶

包含在20 μL和60 μL包装规格中：

5倍反应缓冲液 250 mM 磷酸钠，pH 5.0

比活性： >80 U/mg

活性 ：>50 U/ml

分子量： ~140,000 道尔顿

pH范围 ：5-7，最佳pH 5.0

建议用法：

向管中加入高达100 μg的糖蛋白或1 nmol的寡糖。

用去离子水调整至14 μl的最终体积。

加入4 μl 5倍反应缓冲液（pH 5.0）。

加入2 μl的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。

在37?C下孵化3小时。

注意：如果存在双分叉GlcNAc或beta(1-2)GlcNAc-alpha(1-6)Man，则将孵化时间增加至18小时。

特异性 ：切割所有非还原末端β连接的N-乙酰氨基葡萄糖。双分叉GlcNAc减慢反应速度。

比活性测定： 定义为在37?C，pH 5.0条件下，1分钟内产生1 μmole的对硝基苯酚所需的酶量，来自对硝基苯基-β-D-N-乙酰氨基葡萄糖苷。

储存 ：将酶储存在4?C。

纯度 ：每批N-乙酰氨基葡萄糖苷酶都经过以下方式测试污染性蛋白酶；10 μg的变性牛血清白蛋白与2 μL的酶一起孵化24小时。经处理的BSA的SDS-PAGE分析显示没有降解迹象。

生产宿主菌株经过广泛测试，不产生任何可检测的糖苷酶。

稳定性： 在适当储存的条件下至少稳定12个月。暴露在环境温度下几天不会降低活性。

QA-Bio-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶文献参考：

Clarke, V. A., N. Platt and T.D. Betters. Cloning and expression of the beta-N-acetylglucosaminidase gene from Steptococcus pneumoniae. Generation of truncated enzymes with modified aglyconn specificity. J Biol Chem 270:8805-8814 (1995).

Dwek, R. A., C. J. Edge, D. J. Harvey, M. R. Wormald and R. B. Parekh. Analysis of glycoprotein-associated oligosaccharides. Ann Rev Biochem 62: 65-100 (1993).

Glasgow, L.R., J.C. Paulson and R.L. Hill. Systematic purification of five glycosidases from Streptococcus pneumoniae J Biol Chem 252:8615-8623(1977).

Kobata, A. Use of endo- and exoglycosidases for structural studies of glycoconjugates. Anal Biochem 100: 1-14 (1979).

Prime, S., J. Dearnley , A. M. Venton, R. B. Parekh and C. J. Edge. Oligosaccharide sequencing based on exo- and endoglycosidase digestion and liquid chromatographic analysis of the products. J Chromatogr A 720: 263-274 (1996).

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