β-半乳糖苷酶染色试剂盒--染色步骤说明

大肠杆菌LacZ基因是一种常用于检测载体介导基因转移表达效率的报告基因。它也常用于研究基因启动子调控。LacZ编码的β-半乳糖苷酶是一种近乎理想的表达选择，因为它非常稳定，抗蛋白酶降解，能够利用多种底物，并且可以方便地在原位进行检测。AkrivisBio的β-半乳糖苷酶染色试剂盒是一种简单、灵敏的检测方法，利用无色底物X-Gal生成一种强烈的蓝色不溶性靛蓝产物，可在显微镜下轻松观察。

艾美捷β-半乳糖苷酶染色试剂盒：

货号：COS-0104

规格：包含足够染色20个12孔板的试剂，或等量体积的6孔板或24孔板。

样本类型：贴壁细胞、悬浮细胞

适用范围：所有物种

检测方法：光学显微镜

检测类型：定性

应用：用于在光学显微镜下观察细胞中的β-半乳糖苷酶活性。

检测范围：在每孔10000 - 100000个细胞之间响应高度线性。

储存条件：-20°C

运输温度：凝胶冰袋

有效期：自发货日期起一年

β-半乳糖苷酶染色试剂盒组成：

- 固定液：125 ml（NM COS-0104-A）

- X-Gal冻干粉：绿色（COS-0104-B）

- 染色缓冲液：125 ml（WM COS-0104-C）

- 染色补充液：1.5 ml（红色，COS-0104-D）

储存和操作：

未开封的试剂盒应储存于-20°C。开封后，除X-Gal应储存于-20°C外，其他组分均可在4°C下保存。

用户自备材料：

- PBS 约1 L

- DMSO或DMF

- 聚丙烯管（如Eppendorf等带盖的尖底离心管）。不要使用聚苯乙烯容器。

- 70%甘油

染色步骤：

A. 一般注意事项：

本协议适用于12孔培养板的孔。如果使用其他规格的培养板，请按比例增加或减少体积。

B. 试剂准备：

将20 mg X-Gal溶解于1 ml DMSO或DMF中，制备20X储存液。未使用的X-Gal溶液可在-20°C下保存长达一个月。

注意：始终使用聚丙烯容器或玻璃容器来制备和储存X-Gal溶液。不要使用聚苯乙烯容器。如果出现沉淀，只需将溶液加热即可重新溶解沉淀物。

C. 染色：

1. 移去培养基，用1 ml PBS洗涤细胞一次。

2. 用0.5 ml固定液在室温下固定细胞10 - 15分钟。

3. 在细胞固定过程中，仅使用聚丙烯管制备以下染色液。每个孔需要0.5 ml染色液。

- 按以下比例制备足够数量的染色液：

- 染色缓冲液：470 ?l

- 染色补充液：5 ?l

- 20 mg/ml X-Gal（溶于DMF）：25 ?l

4. 用1 ml PBS洗涤细胞两次。

5. 向每个孔中加入0.5 ml染色液，盖上培养板，于37°C孵育过夜。

6. 次日，在约200X放大倍数下用显微镜观察细胞，观察蓝色的出现。

7. 对于长期保存染色后的培养板，移去染色液，并在细胞上覆盖70%甘油。于4°C保存。